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注射用重组人干扰素α2b稳定性分析 摘 要 结合本人在公司实习的相关经历与心得，本文将对该公司主导产品“注射用重组人干扰素α2b的稳定性加以分析，并最终得出科学的结论。 关键词：注射用重组人干扰素α2b，稳定性，分析。 目 录 摘 要 ………………………………………………………………………1 ………………………………………………………………………3 第一章 注射用重组人干扰素α2b简介 …………………………………3 第一节 基因工程菌E.coli DH 5α/pUB 419 ………………………4 第二节 生产工艺 …………………………………………………… 第三节 质量控制 ......................5 第二章 注射用重组人干扰素α2b（500万国际单位）稳定性实验 …第一节 实验目的 ……………………………………………………第二节 实验材料 ……………………………………………………第三节 实验方法………………………………………………..…..6 第四节 结果与分析…………………………………………………7 第五节 结论……………………………………………………...….8 第三章 ………………………………………………………………9 参考文献 ………………………………………………………………..….11 引 言 1957年Isaacs Lindenmann发现干扰素及其作用，20世纪80 年代，美国、瑞士等国的科学家以基因工程的方式，把干扰素制备成治疗药物，投放市场，它很快成为国际公认的治疗肝炎、肿瘤等疾病的首选药。 注射用重组人干扰素α2b主要用于治疗某些肿瘤，如毛细胞性白血病、慢性髓细胞性白血病、多发性骨髓瘤、非何杰金氏淋巴瘤、恶性黑色素瘤、肾细胞癌、喉乳头状瘤、卡波氏肉瘤、卵巢癌、基底细胞癌、表面膀胱癌等。还可用于治疗某些病毒性疾病，如急慢性病毒性肝炎、带状疱疹、尖锐湿疣。 第一章 注射用重组人干扰素α2b简介 第一节 基因工程菌E.coli DH 5α/pUB 419 将含有人α2b干扰素基因cDNA的pBT 319用EcoR I 和Pst I 酶消化，通过克隆，组建高效表达目的基因的质粒pUB 419，将此质粒转化大肠杆菌DH5α株，建成高效表达人α2b干扰素的工程菌。 α2b干扰素cDNA插入片断的核苷酸序列，经测定与文献报导相符。 质粒pUB 419特点为： 、Trp启动子，以增强表达量； 、四环素抗性基因； 、质粒-宿主稳定性好。 目的基因表达产物经免疫方法鉴定，它的活性不能被抗人α1干扰素，抗γ干扰素血清所中和，而能被抗人白细胞和类淋巴细胞所中和。产物分子量及氨基末端氨基酸序列与文献报导的人α2b干扰素相同。 第二节 生产工艺 、工程菌发酵工艺在摇瓶研究的基础上，使用B.Braun公司10升自动发酵罐进行了大量试验。对培养基的配方及补料方式逐项进行了深入的研究，建立了工程菌高密度、高表达发酵工艺。工程菌发酵周期15-17小时，发酵最终浓度为100g菌体湿重/L左右，效价稳定在8－10×108IU/L。 、干扰素纯化工艺具体纯化路线为： 高压匀浆破菌→酸碱变性处理→硫酸铵盐析级分→葡聚糖凝胶脱盐→CM纤维素离子交换层析→单克隆抗体免疫亲和层析→分子筛凝胶过滤层析 菌体经匀浆缓冲液悬浮后，通过高压匀浆泵2次匀浆处理，可将绝大部分菌体彻底破碎，经高速离心分离得到的上清液用盐酸调至pH2.5左右，充分利用了α干扰素耐酸性的特点，使大量杂蛋白及核酸类物质变性沉淀。这样离心后得到的上清再经硫酸铵盐析级分，大大地浓缩了提取液，并有较好的纯化效果。然后，通过脱盐、上CM纤维素柱层析，进一步去除了杂蛋白及核酸，为进行免疫亲和层析作好了准备。经过单抗亲和层析，产品纯度一般可达90%。再经过分子筛层析，就能顺利地得到纯度95%以上的α2b干扰素成品。 第三节 质量控制 质量控制参照《中国生物制品规程》2000年版重组人干扰素α2b制造及检定规程进行。 第二章 注射用重组人干扰素α2b（500万国际单位）稳定性实验 第一节 实验目的 考察注射用重组人干扰素α2b（500万国际单位）在实际保存条件（2~8℃）下，长期存放其外观（是指冻干粉的颜色和加水溶解后的色泽与澄明度）、生物活性、pH值随时间变化的规律。 第二节 实验材料 、稳定性试验设备：2~8℃冰箱。 、生物活性测定 三、pH值测定：酸度计，标准pH值溶液（4.00；6.86