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实验四 压碎法制片 压片法（压碎法） 压片法：是把动、植物的器官或组织经过处理后压在载玻片上，使细胞成一薄层，以便进行观察。 压片法为细胞学、遗传学研究较为理想的方法，主要用于染色体的形态观察、染色体计数、细胞分裂观察等。 一、实验目的 学习压碎法制片方法； 观察染色体的数目和形态。 二、实验材料及用品 实验材料：洋葱根尖 实验用具：载、盖玻片；显微镜；镊子；恒温水浴锅、酒精灯、试管、培养皿等。 实验药品：卡诺氏固定液、对二氯苯饱和水溶液、70%AL、50%AL、1N盐酸、1%醋酸洋红、45%醋酸、液氮、加拿大树胶。 三、实验步骤 选材（0.5-1cm根尖） 预处理（对二氯苯饱和水溶液，1-3h） 固定（卡诺氏固定液，2-24h，低温） 保存（70%AL，4℃） 复水和洗涤（50%AL，5min；蒸馏水，2次，每次5min） 解离（1N Hcl, 5-10min) 水洗（蒸馏水，2次，每次5min） 染色（1%醋酸洋红，20-30min） 压片 镜检 烘烤（酒精灯，来后烘烤3-4次，微热） 冰冻分离盖玻片 封片 （加拿大树胶） 卡诺氏固定液（纯酒精：冰醋酸=3:1）穿透力强而快，固定原理：纯酒精固定细胞质，冰醋酸固定染色质，并能防止组织由于酒精所引起的高度收缩与硬化 解离的目的？方法：取一离心管倒入1N Hcl后放入水浴锅中预热到60℃，然后将材料转移到试管中 预处理的目的？预处理试剂还有哪些？ 将染色适度的材料放在载玻片上，从根尖向上约2-3mm处切下，然后切碎，滴一滴45%醋酸，盖上盖玻片，用镊子轻轻敲打，使根尖细胞分散开，再在盖玻片垫上两层滤纸，用大拇指加压，直到根尖细胞均匀地分布于载玻片上。 烘烤的目的？ 将片子置于液氮罐中冰冻后，用刀片迅速揭开盖玻片，待干后进行封藏。 核染色剂，能将染色体染色，细胞质不染色 压片后用吸水纸吸去多余的醋酸，平放静置10min后观察 酸解法 优点：制片清洁，染色体清晰，组织软化好，易于压片； 缺点：染色体较软，容易缠绕，不易分散；对小型染色体的材料效果较差。 注意：酸解是本实验成败的关键之一。酸解温度应保持在60℃（上下浮动不超过0.5℃），如果温度过低或时间过短，酸解不够，染色会过浅；若温度过高或时间过长，会造成酸解过度，使DNA完全解聚，造成染色浅或不均一的现象。 注意事项 压片材料要少，避免细胞紧贴在一起，致使细胞和染色体没有伸展的余地； 解离时间不可过长，以免染色体结构受损；解离后水洗要彻底，否则不易着色； 用镊子敲打盖玻片时，用力要均匀； 放置出现气泡。 四、实验结果 根据制片结果观察洋葱根尖有丝分裂的各个时期，并观察染色体数目是多少？ 制片质量如何？（染色体是否分散，计数是否顺利等？） 压片法 莴苣染色体 五、作业 实验完毕，每人交制好的玻片标本1片，在标签纸写上玻片名称及自己的姓名和日期； 实验报告（姓名和日期）：要求最后把思考题加上。