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专题一 基因工程 一、常见问题： 1、基因工程的原理是 基因重组 2、基因工程的操作水平是分子水平 3、基因工程需要使用的酶是限制酶、DNA连接酶 4、目的基因的体外扩增方法：PCR技术 5、PCR技术需要使用的酶是热稳定DNA聚合酶，PCR 的原理: DNA复制 PCR的过程是：变性（95℃DNA解旋）、 复性（55℃引物与解旋后的DNA单链结合）、 延伸（72℃在Taq酶催化下，将脱氧核苷酸合成子链） 6、一个基因表达载体的组成:目的基因+启动子+终止子+标记基因。 二、基因工程操作的基本工具 1.基因的剪刀是限制酶 作用：识别特定的核苷酸序列，并切割特定部位的磷酸二酯键。 2.基因的针线是DNA连接酶 作用实质：将互补配对的两个黏性末端连接起来，使之成为一个完整DNA分子。即连接磷酸和脱氧核糖形成磷酸二酯键。 3.基因的运输工具是运载体 三、基因工程的基本操作程序 1.第一步是目的基因的获取； 2、第二步是基因表达载体的构建； 3、第三步是将目的基因导入到受体细胞； ①将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法、花粉管通道法。 ②将目的基因导入动物细胞的方法是显微注射法。 ③将目的基因导入微生物细胞的方法是Ca2+处理法。 4、第四步是目的基因的检测和鉴定。 ①用DNA分子杂交法法检测转基因生物的染色体DNA是否插入了目的基因。 ②用DNA分子杂交法检测目的基因是否转录出了mRNA。 ③用抗原-抗体杂交法检测目的基因转录出的mRNA是否翻译成蛋白质。 ④ 个体生物学水平的鉴定：如转基因抗虫植物是否出现抗虫性状。 三、蛋白质工程 1 ．蛋白质工程的程序 专题 2 细胞工程 一、植物组织培养技术 1.原理：植物体细胞全能性 。 2、过程：________________________________________ 必需使用的激素是生长素、细胞分裂素。 3、实例:植物离体的体细胞或花药离体培养 二、植物体细胞杂交技术 1 ．原理：细胞膜流动性。 2、去除细胞壁要使用果胶酶或纤维素酶。 三、动物细胞培养技术 1、10→50 代的细胞群叫细胞细胞株， 50代以后的细胞群叫细胞细胞系。 2、植物组织培养和动物细胞培养的比较： 植物是固体培养基，动物是液体培养基。 3、动物培养基中必须加入天然成分是血清. CO2的作用是维持PH值。 4、均需无菌操作。 5、将动物细胞分开的酶是胰蛋白酶. 四、动物体细胞核移植技术 1 ．动物核移植：是将一个动物细胞的细胞核，移入一个去核的卵细胞中，使其重组并发育成一个新的胚胎，这个胚胎最终发育为动物个体。是一种无性生殖技术，用核移植的方法得到的动物称为克隆动物。 2、该技术证明动物体细胞核具有全能性。 2、受体细胞为什么选用卵细胞？ ①体积大，易操作 ②含有促使细胞核表达全能性的某种物质和营养条件。 五、动物细胞融合技术 1.原理：细胞膜流动性 2. 意义：突破有性杂交的局限，使远缘杂交成为可能；用于细胞遗传、细胞免疫、肿瘤和生物新品种培育的研究；单克隆抗体的制备。 3、植物体细胞杂交诱导手段有物理、 化学（聚乙二醇）诱导的方法， 动物细胞融合特有的是通过 灭活病毒诱导 生物手段 。 4、单克隆抗体 （动物细胞融合技术应用例子） 单克隆抗体制备简图 （1 ）杂交瘤细胞特点：既能大量增殖， 又能产生单一抗体。 （2）单克隆抗体的优点：特异性强、 灵敏度高、产量大 专题三：胚胎工程 1 ．防止多精入卵的保障: l ）透明带反应 2 ）卵黄膜封闭作用 2、受精的标志和受精完成的标志 l）受精标志：在透明带和卵黄膜之间 观察到2个极体。 2）受精完成的标志：雌、雄原核的融合。 3、胚胎移植的生理学基础 1 是动物发情排卵后，同种动物的供受体 生殖器官的生理变化相同； 2 是早期胚胎处于游离状态； 3 是受体对移入子宫的外来胚胎基本上不 发生排斥反应； 4 是供体胚胎的遗传特性在孕育过程中不 受任何影响。 4 ．胚胎工程基本程序（以牛为例） 1 选择供、受体牛，注射促性腺激素， 进行同期发情处理 2）注射促性腺激素，供体_超数排卵 3）对供体人工授精或配种。 4）胚胎的收集：用特制的装置将胚胎冲出，也叫冲卵。 5、胚胎分割 1 ：动物无性繁殖的方法之一。 2 材料：发育良好，形态正常的桑葚胚或囊胚。 3 注意问题：一是均等分割；二是分割的不能太小。 6、胚胎干细胞 来源：由原始性腺或早期胚胎中分离出来的一类细胞。 专题五：生态工程 一、生态工程的基本原理 1、物质循环再生原理 2、物种多样性原理：物种繁多而复杂的生态系统具有较高的抵抗力稳定性. 3、协调与平衡原理：处理好生物与环境的协调与平衡，需要考虑环境承载力。环境承载力（又称环境容纳量）是指某