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β-酪啡肽-7功效学研究进展;目录;酪啡肽的定义;β-酪啡肽的发现;β-酪啡肽的发现;β-酪啡肽的结构特征;β-酪啡肽-7的制备;β-酪啡肽-7的制备;二、反相高效液相色谱（RP-HPLC）鉴定酪蛋白酶解产物中的β-CM-7 方法： 1.待测液的预处理:取各时间点酪蛋白酶解液的上清液2m1，经0.22um微孔滤膜过滤，用于RP-HPLC分析。 2.用缓冲液平衡层析柱，待运行结果显示稳定的基线时，分别取各时间点的20ul酪蛋白酶解上清液手工进样。 3.检测波长215nm，流速0.75，线性洗脱运行30min。 4.将加样酪蛋白酶解上清液换成β-CM-7标准品，制定标准峰。 5.内标法检测:在待测样品中加入标准β-CM-7溶液，用以增强待测样品的分析结果。 ;三、葡聚糖凝胶 （Sephadex）G-15凝胶层析分离纯化酪蛋白酶解上清液 结果：120min酪蛋白酶解上清液，经葡聚糖凝胶G-15层析结果图，在215nm消光读数，绘制的洗脱曲线。收集不同组分洗脱液，按管号为6-19, 20-35, 36-50，51-73, 74-89, 90-120加以合并，得到6个组分。其中第六组分(箭头所指)中最有可能含有β-CM-7等小分子物质。;三、 β-酪啡肽-7的主要生理功能及研究进展;研究进展;（6）潘翠玲发现饲喂β-酪啡肽-7能够促进仔猪免疫器官和组织的发育;2.样品处理： 收集胃和十二指肠内容物，按1:1的比例用生理盐水将内容物稀释，4℃ 3 000 r/min离心15 min，取上清液测相关酶的活性;取2 cm X 2 cm的胃窦、截取十二指肠的中部、空肠前段(空肠的前1/ 3)的中部、回肠的中部各2cm，用生理盐水冲去内容物，置于Bouin氏液固定，常规石蜡切片(厚度为6 um) , HE染色，树胶封片用Olymps显微镜观察并照相。 3.检测项目 应用Image-processing-plus图象分析系统测量肠绒毛长度、绒毛宽度、腺隐窝深度和肠壁肌层厚度。测定仔猪胃内容物的胃蛋白酶总活性，测定仔猪十二指肠内容物的淀粉酶活性、脂肪酶活性、胰蛋白酶总活性。 ;;实验数据：;实验结果分析：;（9）印虹等人研究发现乳源β-酪啡肽-7具有降血糖作用;3.指标测定 （1）血液中葡萄糖浓度测定 按试剂盒说明书氧化酶法测定血清中葡萄糖浓度。具体取血清10uL，加入1 mL葡萄糖测定液，37℃水浴15 min后，冷却，在波长505 nm处测定其OD值，根据计算公式计算血糖值。 G =OD测定管/OD标准管*5.55mmol/L （2）肝糖原、肌糖原含量的测定 按试剂盒说明称取肝脏、肌肉各80 mg左右，按照体积比1: 3加碱液后沸水煮20min，流水冷却，加蒸馏水稀释成1%肝脏，5%肌肉的糖原检测液。取检测液100uL,显色液2 mL，置沸水煮5 min，冷却，在波长620 nm处测OD值，根据下面计算 肝糖原二测定管OD值/标准管OD值、标准管含量、样本测定前稀释倍数(100) *10/1.11 肌糖原二测定管OD值/标准管 OD值x标准管含量x样本测定前稀释倍数(20) *1011.11;（3）血清中胰岛素、胰高血糖素水平的测定 胰岛素测定:取100uL血清，加入豚抗一Ins.抗体100 uL, 125I- Ins. 100 uL，混匀放置16-18 h，加入Ins，驴抗豚免疫分离剂500uL，充分混匀后，室温放置15 min, 3500rpm离心15 min，吸弃上清，测各管沉淀物的放射性计数(cpm)。 胰高血糖素检测:取200uL血清，加入豚抗一Glu.抗体100uL，混匀室温放置4 h,加入125I- Glu. 100 }.L，混匀放置16-18 h，加入Glu.驴抗豚免疫分离剂500uL，充分混匀后，室温放置15 min, 3500 rpm离心15 min，吸弃上清，测各管沉淀物的放射性计数(cpm )。 （4）参照戴岳方法测定肠黏膜a-葡萄糖苷酶活性 （5）将刮取的肠囊黏膜，按照试剂盒说明检测其Na-K-ATP酶活力。;（6）小肠上皮黏膜SGLT -1 mRNA表达分析 提取样品总RNA→反转录→设计目的基因引物→序列分析→SGLT -1 mRNA的RT- PCR分析（重复两次） （7）数据处理 采用SPSS13.0统计软件进行统计，差异显著性检验采用独立样本t检验和单因子方差分析(Oneway ANOVA， LSD )。所有数值以平均值士标准误(Mean±SE)表示。 ;实验结果：;实验结果：;实验结果：; β-CM-7对大鼠小肠站膜SGLT -1 mRNA表达的影响(n=8) A为RT-PCR电泳图;总结：; 生物活性