肺癌个体化检测及质控资料.pptVIP

肺癌个体化检测及质量控制;;2004 WHO Lung Cancer Classification ;腺癌; ;小活检和/或细胞学标本难以进一步分型，通常诊断为非特指性NSCLC（NSCLC-NOS） 提出借助于免疫组织化学（TTF-1、p63(p40)等）尽可能将NSCLC区分为倾向腺癌和倾向鳞状细胞癌，以提供药物治疗的选择 肺腺癌对多靶点抗叶酸药物培美曲赛（pemetrexed）和抗血管内皮生成药物贝伐单抗（bevacizumab）治疗有效，而鳞状细胞癌对培美曲赛治疗效果不如腺癌，用贝伐单抗治疗可引起威胁生命的大出血; TTF-1 ; 鳞癌? 腺癌?;小活检和细胞学标本除用于病理诊断外，要适当留存一些标本做分子检测（基因突变、扩增和染色体易位等） 新分类还推荐如有可能，细胞学检查最好与小活检细胞学检测一起进行，以提高诊断准确性 细胞学是一个有用的诊断方法，尤其是和组织学相结合时 从细胞穿刺或胸腹水标本中保存细胞包埋块（cell block)，???于分子检测 ;2011年NCCN非小细胞肺癌治疗指南（中文版）; 2012 NCCN指南推荐所有NSCLC患者进行检测 中国版NCCN指南与美国版NCCN指南的区别：除了腺癌、大细胞癌和未分类的NSCLC患者，中国版NCCN指南要求鳞癌也要进行EGFR突变检测;2013NCCN指南与既往不同在于：未知人群减少，腺癌/大细胞癌患者均需要做检测为I类证据/不吸烟鳞癌也可以EGFR突变检测;卫生部原发性肺癌诊疗规范（2011）;Nature Review 2007, 7:169;Dacic S. Adv Anat Pathol 2008; 15:241-247. Riely GJ, et al. Clin Cancer Res 2006; 12(24):7232-7241. Murray S, et al. J Thorac Oncol 2008; 3:832-839.;肺癌与EGFR;; 项目;EML4-ALK检测：方法概述;荧光原位杂交 (FISH);逆转录-聚合酶链反应 (RT-PCR);Ⅰ期临床结果再回顾;三种检测方法比较;FISH、IHC和RT-PCR比较参数表;ROS1基因与NSCLC;ROS受体酪氨酸激酶的靶向治疗原理;克唑替尼: 概述;ROS1基因重排;分子靶向基因检测质量问题;分子病理实验室质量要求;临床标本与研究标本的差异;分子检测与靶向治疗的关键步骤;分子检测与靶向治疗的关键步骤;标本来源 手术切除标本 气管镜活检标本 经皮穿刺标本 淋巴结穿刺标本 胸水/心包 细胞学标本 血清DNA标本及循环细胞;常用标本获取方法;取样中存在的问题;肿瘤标本获取的主要途径;标本的获取：以穿刺为例;标本的获取;;适宜的切片： HE片确认*，癌细胞数≥200个 (不推荐依经验盲取) 常规切片(4~5μm厚，普通载玻片) 连续切片8~10张 刀片：一次性(不推荐交叉使用);如何获取优质的标本：标本类型;如何获取优质的标本：标本类型;分子水平的肺癌细胞存在异质性 肿瘤内异质性 原发部位与转移部位的异质性;如何获取优质的标本：标本的采集和储存;如何获取优质的标本：标本含量;分子检测与靶向治疗的关键步骤;基因突变检测影响因素 ---方法学因素;直接测序法;荧光定量PCR;石蜡切片显微切割;ARMS vs. DNA测序;ARMS vs. DNA测序;EGFR基因突变检测方法的选择;关于EGFR突变检测共识（中华病理学杂志 2011年10期）;关于EGFR突变检测共识;EGFR突变检测病理质控;全国EGFR基因突变质量控制检测; ;PCR反应最常见、最重要的污染物是PCR产物。 UNG酶可以选择性水解断裂含有dU的双链或单链DNA中的尿嘧啶糖苷键，形成的有缺失碱基的DNA链，在高温下会进一步水解断裂，从而被消除。 UNG酶的最佳活性温度为40-50℃，95℃灭活。 ;防污染热启动PCR试剂盒以dUTP取代dTTP，所以PCR产物都是含有dU的DNA链。 在PCR开始前增加42℃的保温步骤，UNG酶可作用于已有的U-DNA污染物，消除由于污染DNA产生的扩增，从而保证扩增结果的特异性，准确性。 UNG酶在高温下被灭活,不会再降解新扩增的产物U-DNA。;UNG酶防污染体系;基因检测报告;Thank you!