半夏的组培快繁课题.pptVIP

半夏的组培快繁 半夏属天南星科草本植物， 半夏是一种重要的中药材， 其块茎入药，有祛痰、镇咳及消肿等功效。 半夏 半夏有毒 半夏植物全株有毒，块茎毒性较大，生食0.1—1.8g即可引起中毒。 对口腔、喉头、消化道粘膜均可引起强烈刺激； 服少量可使口舌麻木，多量则烧痛肿胀、不能发声、流涎、呕吐、全身麻木、呼吸迟缓而不整、痉挛、呼吸困难，最后麻痹而死。 有因服生半夏多量而永久失音者。 半夏解毒 治疗半夏中毒，用生姜捣汁服下，其毒解。 前景广阔 在自然界中，半夏主要由生于叶柄下的珠芽进行繁殖，生长缓慢，采集困难，不能广泛栽培，因此药源十分紧张， 市场供不应求，2005年冬药市有沽55～65元/千克，出口和内销俱紧俏， 应用组培快繁技术加速半夏种苗生产前景广阔。 (一)无菌培养物的建立 1．外植体采集与消毒灭菌 采集半夏块茎或珠芽，用清水洗净，剥去块茎外皮， 外植体消毒灭菌 在超净工作台上先用70％酒精浸泡30—60s，用无菌水冲洗1次，倒掉无菌水，加入0.1％氯化汞液，块茎浸泡杀菌10min， 或叶片浸泡灭菌7min,用无菌蒸馏水冲洗3～5次，除去氯化汞，防止毒害培养物。 2．块茎启动培养 A、将经过消毒的珠芽和块茎取出，在无菌滤纸上切成小块，每个块茎可纵切为4～8块，使每个小块上都有芽原基。 B、将切块分别放到愈伤组织诱导培养基上。 C、启动培养基:MS+2,4-D 0.3～1.0mg／L+BA0.5～2.0mg／L。 D、培养情况 2—3周即可见愈伤组织形成， 形成的愈伤组织： ①如果致密、坚硬，绿色或浅绿色，易形成类似珠芽的组织块，可分化产生芽。 ②如果疏松，白色透明或半透明，则不易分化产生芽，应丢弃。 E、培养条件 培养室温度白天25℃土2℃，晚上18℃土2℃，有利于半夏的分化和愈伤组织形成； 光照强度为1000～2000 Lx， 光照时间为8～10h／d。 (二)继代增殖培养 1．块茎诱导丛生芽 在启动培养基上，经过3周左右，即可见块茎切块表层变为绿色，块茎体积也发生膨大， 再经3～4周，就可见不定芽出现，每个切块上可产生5—10个芽。而且，在这种培养基上芽可继续生长，不需要再转到壮苗培养基上。 也可将带有小芽的切块重新切割再接种到芽分化培养基上，令其产生更多的新芽。这种培养方法简便易行，周期短，但繁殖速度受原始接种材料数量的限制，需大量采集块茎。 2．愈伤组织诱导丛生芽 在启动培养基上接种的块茎，经过一段时间后，便可产生较多的愈伤组织， 再将愈伤组织转到分化培养基MS+6-BA1.0～1.5mg／L+NAA0.5～1.0mg／Ｌ上， 放在25～30℃的温度下培养， 经过20d左右，就可看到从愈伤组织上分化形成的许多不定芽，每块愈伤组织上可形成10个左右不定芽。 (三)生根培养 将从块茎切块上产生的不定芽和由愈伤组织产生的不定芽转移到生根培养基上。 生根培养基是MS+IBA1.0mg／L+NAA0.03mg/L， 或1／2MS+NAA0.3～0.5mg／L。 在两种生根培养基上培养20d左右，不定根从小芽的基部产生，多者每小芽可产生5～6条根。 根生长到1.0cm左右，可移至培养室外光线比较充足的室内炼苗，约15d便可移栽到生长基质中。 (四)试管苗移植 从培养瓶中取出带根小苗，应特别注意不要损伤根系。 取出的小苗先放到自来水中，用柔软的小刷子轻轻刷掉根上的琼脂，越彻底越好，要尽量不伤根。 清洗完成后，从自来水中取出小苗，放在比较干净的报纸或草纸上，待根、叶上没有多余的水分再移栽入生长基质中。 移栽 移栽基质的组成是5份腐殖土(草炭或山上树木周围的细土)、3份蛭石、1份细沙、1份珍珠岩。 移栽完成后转入温室或大棚中，注意温度不可太高，相对湿度应尽量保持在90％以上，初期要适当遮阳， 经20～30d，新根就可形成，此时即可移栽到种植田中，进行正常的田间管理。当年移栽的试管苗当年则可收获块茎，千粒重约2kg。 (五)试管块茎的培养 将半夏茎尖接种到MS+KT0.5mg／L+NAA0.2mg／L的固体培养基上，获得小植株后， 再用其叶柄作外植体，在MS+2,4-D+KT的培养基上诱导出愈伤组织，继而通过形成小块茎的途径产生完整植株，其移栽成活率可达100％。 由此所得的试管苗块茎产量(鲜重)比常规小块茎繁殖的块茎产量高103％； 试管苗块茎的总生物碱含量高达0.344％，而野生和人工栽培半夏总生物碱含量分别仅为0.264％和0.203％。组培技术生产的半夏在产量和质量上均有所提高。 * *