第四章酶forgraduatescandidates讲课.ppt

称取25mg酶粉配成25ml溶液，从中取出0.1ml酶液，以酪蛋白为底物，用Folin-酚比色法测定酶活力，得知每小时产生1500μg Tyr。 另取2ml酶液，用凯氏定氮法测得蛋白氮为0.2mg。 以每分钟产生1 μg Tyr的酶量为1个活力单位 求：比活力 1ml酶液中的总蛋白含量0.625mg 1ml酶液中的总活力250u 比活力= 250u/0.625mg=400U/mg 某一粗酶液，每ml含蛋白质20mg，取10μl，测得其酶 反应速度为0.1μ mol/min。取此粗酶液50ml经盐析法分离得沉淀物。再溶于10ml缓冲液中。此时酶液每ml含Pr 24mg，同样取10ul测得其酶反应速度为0.48μ mol /min 计算： 提取过程中酶蛋白的回收率 酶纯度提高的倍数。写出计算过程 。 原始比活力=0.1 IU / (10 ×20 ×10-3)mg=0.5 IU/mg (24 ×10)/ (50 ×20)=24% 提纯比活力=0.48 IU / (10 ×24 ×10-3)mg=2 IU/mg 4倍 酶的制备过程中每步都应进行鉴定 常用的鉴定指标为： 回收率％＝每次总活力×100 /第一次总活力 纯化倍数=每次比活力/第一次比活力 产率 1961年国际酶学委员会规定:特定条件下1分钟内转化1μmol底物的酶量是 （ ）。 A.1U B.1U/mg C.1Kat D.1IU 已知1mL酶溶液中含蛋白质量为0.625mg，每mL酶溶液所含单位为250，该酶的比活性应是（ ）。 A. 200u/mg酶蛋白 B. 300u/mg酶蛋白 C. 400u/mg酶蛋白 D. 500u/mg酶蛋白 E. 600u/mg酶蛋白 测定酶活力时下列哪种处理方法更合理（ ）。 A.其中一种用缓冲液配制即可 B.分别用缓冲液配制，然后混合进行反应 C. 先混合，然后保温进行反应 D. 分别用缓冲液配制，再预保温两者，最后混合反应 纯化酶制剂时，酶纯度的主要指标 A. 蛋白质浓度 B. 酶量 C. 酶的总活性 D. 酶的比活 E. 最底的Km 何为酶的活力和比活力？测定酶活力时应注意什么？为什么测定酶活力时以测定初速度为宜，并且底物浓度远远大于酶浓度？ 酶活力：酶催化某一化学反应的能力， (一定条件下催化的化学反应的反应速度来表示) 酶比活力：单位质量酶（1mg或1g）所具有的总活力。 测定初速度：酶促反应只在反应初始阶段有恒定的速率。 酶活性受： [S]、pH、温度、抑制剂、激活剂的影响， ——要选择最适条件(pH、T、[S]、离子强度) 酶活力与酶量成正比： [S] [E]保证所有酶都结合底物 甘油醛-3-磷酸脱氢酶，相对分子质量为4万，由4个相同亚基组成，每个亚基上有一个活性位点，在最适条件下，5μg纯酶制品每分钟可以催化2.8μmol甘油醛-3-磷酸转化为甘油酸-3-磷酸。请计算酶的比活力和单个活性位点的转换数。 1 IU= 1 ?mol / min 5μg中含有2.8个IU 比活力=2.8IU / (5×10-3)mg=560 IU/mg 1mol : 4×104g 1 ? mol : 4×104 ? g 5? g中的总活性位点数：4×(5/ 4×104 )=5×10-4 ? mol 单个位点转换数：2.8? mol/min / 5×10-4 ? mol =5600/min=93.3/s α-糜蛋白酶（MW 24 000）可以水解苯甲酰-L-酪氨酸乙酯。比活为45.0umol/min/mg酶。已知α-糜蛋白酶只有一个活性位点。求转换数。 1mg中的总活性位点数：1×(103 / 24×103 )=1/24 ? mol 45 ? mol /min / (1/24 ? mol) =45×24/min=1080/min 纯化 步骤 总蛋白/mg 总活力 /U 比活力 /U.(mg蛋白)-1 粗提液 18620 12650 0.68 盐析 440 1520 3.45 离子交换 125 985 7.88 凝胶过滤 12 196 16.33 从某生物材料中提取纯化一种酶，按下列步骤纯化， 计算最后所得酶制剂的比活力、活力回收率和纯化倍数。 回收率=提纯后总活力/提纯前总活力×100%=196/12650×100=1.54% 纯化倍数=纯化后比活力/纯化前比活力=16.33/0.68=24 某酶制剂2mL内含脂肪10mg，糖20mg，蛋白质25mg， 其酶活力与市售酶商品（每克含