微生物研究技术习题.doc

第一章 绪论 1. 微生物的应用 （1）直接利用微生物营养菌体 单细胞蛋白（Single Cell Protein, SCP ）、酸奶、微生态制剂、疫苗，酵母片、蘑菇和受体菌等. （2） 利用微生物代谢产物如：包括初级代谢产物和次生代谢产物，各种氨基酸、有机酸、抗生素、酶类等. （3） 利用微生物的基因 主要是不可培养微生物 采样(提取总的DNA ( 基因克隆 ( 目的基因表达 （4） 利用微生物的新陈代谢如：微生物的分解、转化、修饰作用 （5）利用微生物的拮抗作用如：生物防治、生物农药等 2微生物的应用领域 （1）在环境污染物治理与修复中的应用 （2）在发酵工业中的应用 有机酸：柠檬酸、乳酸、乙酸等 氨基酸：各种氨基酸，如谷氨酸等 抗生素：青霉素、链霉素 酶制剂等：工业用酶：如蛋白酶、淀粉酶、纤维素酶，科研用酶：如限制性内切酶等 （3） 在农业中的应用 肥料：固氮菌肥，磷细菌肥，钾细菌肥料 杀虫剂： 病毒杀虫剂，真菌杀虫剂（白僵菌），农用抗生素：5406，植物生长促进剂等 （4）在医学中的应用： 疫苗的制备和大规模生产；抗生素治疗；针对病原菌开展的以预防、治疗疾病为目的的各项研究； （5）技术应用 PCR（从嗜热菌中分离的DNA聚合酶），利用质粒、病毒为载体进行基因工程研究；利用细菌细胞固定化技术进行发酵生产；基因工程技术。 （6）特殊应用 降解疯牛病蛋白的酶；能“挤出”石油的细菌；能制氢的细菌；能治理污水的细菌；能清洁土壤中毒素的细菌；能协助排雷的细菌； 第三章 菌株的分离与筛选 1.什么是富集培养？ 答：富集培养：指在目的微生物含量较少时，根据微生物的生理特点，设计一种选择性培养基，创造有利的生长条件，使目的微生物在最适的环境下迅速地生长繁殖，数量增加，由原来自然条件下的劣势种变成人工环境中的优势种，以利于分离到所需要的菌株。 哪些分离方法能达到“菌落纯”？ 哪些分离方法能达到“细胞纯（菌株纯）”？ 答：菌落纯：稀释分离法、划线法、组织法 细胞纯：单细胞或单孢子的分离法 分离好氧微生物常用的方法有哪些？ 答：(1)稀释涂布法 (2)划线分离法 (3)平皿生化反应分离法 平皿生化反应分离法有哪些？分别用来筛选哪些菌？各自原理如何？ 答：(1)透明圈法 原理：在平板培养基中加入溶解性较差的底物，使培养基混浊，能分解底物的微生物便会在菌落周围产生透明圈，圈的大小可以放映该菌株利用底物的能力。 筛选：水解酶产生菌 (2)显色圈法 原理：在底物平板中加入特定的指示剂或显色剂，根据颜色变化，将目的微生物快速分离出来。 筛选：果胶酶产生菌、分离谷氨酸产生菌、分离解脂微生物、分离内肽酶产生菌 生长圈法 原理：将待测菌涂布于含高浓度的工程菌并缺少所需营养物的平板上进行培养，若某菌株能合成平板所需的营养物，在该菌株的菌落周围便会形成一个混浊的生长圈。 筛选：氨基酸、核苷酸和维生素产生菌 (4)抑菌圈法 原理：待筛选的菌株能分泌产生某些能抑制工具菌生长的物质，或能分泌某种酶并将无毒的物质水解成对工具菌有毒的物质，从而在该菌落周围形成工具菌不能生长的抑菌圈。 筛选 ：抗生素产生菌 常用的平板初筛的方法有哪些？ 答：方法：(1)形态变异筛选法（2）平皿生化反应筛选法 (3)浓度梯度法(4)染色技术快速筛选法(5)琼脂块大通量筛选法 初筛和复筛的要求有何不同？ 答：初筛是指从大量的菌落中随机挑取进行摇瓶试验并通过检测得到一些较优菌株。 复筛是指将初筛得到的较优菌株再进行多次摇瓶实验验证其效价和传代稳定性，并从中得到一两个或少数几个最优的菌株。 初筛要求：筛选的菌株尽可能多，筛选的菌株越多，就越有希望筛选到所需要的菌株。筛去明确不符合要求的大部分菌株，把具有生产性状的菌株尽量保存下来。 复筛要求：做到精确，测得的数据要能够反映将来的生产水平。 7．菌株的分离和筛选一般可分为如下几个步骤：采样，富集培养，分离纯化，产物鉴别，菌种鉴定，菌种保藏 8. .CM、MM、SM、LM分别表示什么培养基？ 答：CM-----完全培养基 FM-----发酵培养基 MM-----基本培养基 SM------补充培养基 LM------有限培养基 9.什么是菌种退化？菌种退化的原因是什么？如何防止菌种退化？ 答：菌种退化：指生产菌株或选育过程中筛选出来的较优良菌种在生产繁殖中，群体中某些生理特征和形态特征逐渐减退或完全丧失的现象，集中表现在菌种目的代谢产物合成能力降低，产量下降有的是发酵力和糖化力降低。 原因：(1)基因变异(2)分离现象(3)不适宜的环境条件(4)