微生物菌种的保藏.pptVIP

菌种传代与保藏 菌种是从事微生物学及生命科学研究的基本材料. 微生物具有生命活力，在传代过程中易发生变异甚至死亡，因此菌种保藏是一项重要的基础工作，是微生物学基础工作的一项重要内容，也是药品微生物工作中的一项常用技术。 工业微生物菌种保藏，是要使菌种生产能力和与生产工艺相适应的优良性状保持稳定，当然做不到绝对不变，只是力求把这种衰退现象推迟减缓到最低限度。 菌种菌种保藏 1.低温是保藏原理： 在作低温保藏时，注意尽量不损伤细胞。在缓慢冷冻时，胞外基质一般较快结冰而形成冰晶使基质浓度增高，造成细胞水分外渗而大量脱水，可能使细胞死亡。如快速降温，胞内也很快形成冰晶，胞内外渗透压基本平衡，同时胞内冰晶较小，对细胞及原生质膜的损伤也较小，菌株不易死亡，影响也较小。 与低温相关的保藏方法，如冷冻干燥法、超低温保藏法等，都是利用低温条件下细胞与环境的特殊平衡原理而设计的。 低温保藏法这是一种常用的简便方法。 一般的斜面孢子、液态孢子、斜面种子以及用麸皮、大米、小米或碎玉米制成的孢子，可以放在4℃冰箱内保藏，这种温度条件下不能使菌体进入休眠，而仅是抑制微生物的生命活动。 因此，保藏时间不宜过长，一般不超过1～2个月为宜。 本方法虽然简便，但由于菌株处于较高的水平活性下，这对保藏株的生产性状是不利的，因此，生产菌种一般不采用此法保藏。 低温定期移植法： 把培养好的斜面菌种放在低温干燥处保存，定期移植，一般3～6个月移植一次(视菌种特征而定)。也可以用穿刺培养，定期移植法保藏细菌，其效果也较好。 穿刺培养是将含0.6％～0.8％的琼脂培养基装试管灭菌后直立冷凝后，用接种针尖挑取少量菌体，垂直刺入琼脂培养基中心，放在适当温度下培养，待菌长好后即可放低温保存，此法较斜面保存有利，大肠杆菌可保藏2年以上不发生明显变异。 甘油管保藏法：是利用微生物在甘油中生长和代谢受到抑制的原理达到保藏目的。其方法是，将40%的甘油高压蒸汽灭菌待用。将培养好的斜面菌种用无菌种用无菌水制成高浓度的菌悬液(108～1010/ml)。取1ml灭菌甘油放入与甘油充分混匀，使甘油浓度约为20%，于-20℃下冻存。 * * *