微生物菌种复壮与保藏剖析.pptVIP

微生物发酵工程 2 微生物菌种及其复壮与保藏 复习 现代微生物发酵工程研究的内容  2.1工业生产常用的微生物及要求 1. 细菌: 分布最广,数量最多,单细胞原核, 二分裂殖…. 枯草芽孢杆菌---- 淀粉酶、蛋白酶 嗜热乳杆菌----乳酸 醋酸杆菌----醋酸 棒状杆菌----氨基酸 短杆菌----肌苷酸 2.酵母菌: 单细胞真核, 含糖,偏酸,腐生,出芽繁殖, 假丝…. 啤酒酵母----酿酒、细胞色素C、单细胞蛋 白、 甘油、琥珀酸 假丝酵母----面包、石油脱蜡、饲料 类酵母----脂肪酶 3.霉菌:丝状真菌 生产菌种:根霉,毛霉,犁头霉,红曲霉,青霉等 产品:酶制剂; 抗生素;有机酸;甾体激素 4.放线菌: 原核生物, 有机质丰富的,微碱性土壤中, 无形包子或菌丝片断繁殖. 生产菌种:链霉菌属;小单孢菌属; 诺卡菌属等 产品:链霉素; 红霉素; 金霉素;庆大霉素等 菌种退化：生产菌种或选育过程中筛选出来的较优良的菌株，由于进行一种传代或保藏之后，群体中某些生理特征和形态特征逐渐减退或完全丧失的现象。 1.菌种退化的原因 基因突变导致菌种退化： 自发突变与回复突变 10-7----10-9 质粒脱落导致菌种退化： 控制产量的质粒脱落或核内DNA和质粒复制不一致。 连续传代加速退化的发生： 不良的培养条件如营养成分、温度湿度、pH值、通气量等和保藏条件如营养、含水量、温度、氧气等不仅会诱发低产基因型出现，而且会造成低产基因和高产基因细胞的数量比发生变化。 2.菌种退化的防止 3.菌种的复壮及其方法 复壮原理 狭义复壮：从大量退化的菌株中分离筛选到那些仍保持优良性状的个体 广义复壮：在菌种的生产性能尚未退化前就经常有意识地进行纯种分离与生产性能的测试工作 复壮方法 2.3菌种的保藏 一.菌种保藏 广义：在广泛收集实验室和生产菌种、菌株的基础上，将它们妥善保管，是指达到不死、不衰、不污染以便于研究、交换和使用的目的。 狭义：防止菌种退化、保持菌种的生活能力和优良的生产性能，尽量减少、推迟负突变、防止死亡，并确保不污染杂菌。 由于各种微生物的生理，遗传特性不同，适合采用的方法不同 。 (一).斜面保藏法 特点：简便有效，易变异，退化甚至死 亡。 适合：不要求长期保藏的及不适合冷冻干 燥的。 保存期: 3个月 影响保藏效果因素 （二） .液体石蜡油保藏法 保存期: 2-3年，甚至5年传代一次. 特别适合:在固体培养基上不能形成孢子的丝状担子菌，如大型食用真菌和药用真菌以及镰刀菌、红曲霉等. 注意：保藏温度，液体石蜡需灭菌和除水 （三）.干燥保藏法 冷冻干燥法:用保护剂制备菌悬液， 然后将含菌样快速降至冰冻状态，减压抽真空，使冰升华成水蒸汽排出，从而使含菌样脱水干燥， 并在真空状态立即密封瓶口隔绝空气，造成无氧的真空环境， 然后置于低温下保存。 特点：不易发生变异，5-10年。需要冻干机。 适用：除了一些不产孢子的丝状真菌外。 1.安剖瓶：2% 盐酸浸泡7-10h。 装入标签，塞上棉花，灭菌备用。 2．保护剂：选择适合的种类。 预冻：防止泡沫溢出，冻结，升华。 不低于-20℃， 30min ， 疏松状态 时，转入室温抽1h， 融封， 检测真 空度，4℃，避光。 冻干物呈酥块状或松散片状 真空度接近空载时的最高值 以等量水作对照 恢复培养：室温下平衡后，加入最适培养基，控制溶化速度，操作靠近火焰。 避免：样品逸散，污染。 常温下直接真空干燥。设备简单，操作方 便。 适于: 预冻后易受冻伤的菌株 以甘油、二甲基亚砜等作保护剂，在液氮超低温下保藏的方法。 是防止退化的最有效的方法。 适合于各种微生物的保藏。 原理：菌种细胞从常温过渡到低温，并在降到低温之前，使细胞内的自由水通过细胞膜外渗出来。 保护剂：甘油，二甲基亚砜，糊精，血清蛋白等。 不同微生