微生物菌种及其复壮与保藏剖析.pptVIP

Company Logo 2.3菌种的保藏 一.菌种保藏 广义：在广泛收集实验室和生产菌种、菌株的基础上，将它们妥善保管，是指达到不死、不衰、不污染以便于研究、交换和使用的目的。 狭义：防止菌种退化、保持菌种的生活能力和优良的生产性能，尽量减少、推迟负突变、防止死亡，并确保不污染杂菌。 Company Logo 原理 干燥 低营养 低温 Company Logo 干 燥 3 液体 石蜡 2 冻 干 4 真 空 5 液 氮 6 斜 面 1 微生物菌种的保藏法 Company Logo (一).斜面保藏法 特点：简便有效，易变异，退化甚至死 亡。 适合：不要求长期保藏的及不适合冷冻干 燥的。 保存期: 3个月 Company Logo 影响保藏效果因素 营养略贫乏 氮源略多 糖类少 培养基 1 2 4℃ 保存条件 Company Logo （二） .液体石蜡油保藏法 保存期: 2-3年，甚至5年传代一次. 特别适合:在固体培养基上不能形成孢子的丝状担子菌，如大型食用真菌和药用真菌以及镰刀菌、红曲霉等. 注意：保藏温度，液体石蜡需灭菌和除水 Company Logo （三）.干燥保藏法 适于:能产生孢子或芽孢的微生物 沙土 麦麸 硅胶 适合产孢子 的霉菌和放 线菌 适合丝状 真菌和酵 母菌 Company Logo 砂土 沙土管 菌种 粒度，除钙，除铁及pH 。砂和土混合比例：1：1或3：2。121℃ 间歇灭菌3次，每次1-1.5小时 埋沙土 干法 湿法 细胞浓度 108-109 /ml, 0.2-0.3ml/支。抽真空干燥 4小时 砂土保藏法 特点:经济简便，保存时间长，不易变异。一般2-3年. Company Logo 冷冻干燥法:用保护剂制备菌悬液， 然后将含菌样快速降至冰冻状态，减压抽真空，使冰升华成水蒸汽排出，从而使含菌样脱水干燥， 并在真空状态立即密封瓶口隔绝空气，造成无氧的真空环境， 然后置于低温下保存。 特点：不易发生变异，5-10年。需要冻干机。 适用：除了一些不产孢子的丝状真菌外。 （四）. 冷冻干燥保藏法 Company Logo Company Logo 常温下直接真空干燥。设备简单，操作方 便。 适于: 预冻后易受冻伤的菌株 （五）真空干燥法 Company Logo 以甘油、二甲基亚砜等作保护剂，在液氮超低温下保藏的方法。 是防止退化的最有效的方法。 适合于各种微生物的保藏。 原理：菌种细胞从常温过渡到低温，并在降到低温之前，使细胞内的自由水通过细胞膜外渗出来。 （六）.液氮超低温法 Company Logo 保护剂：甘油，二甲基亚砜，糊精，血清蛋白等。 不同微生物的保护剂不同，需实验确定。 甘油10-20%，二甲基亚砜5-10% 安剖瓶的选择：95料或GG17的玻璃管制成。 液氮超低温法 Company Logo 菌种制备和冻结保藏：孢子或菌丝体。-35 ℃以前控制降温速度。 恢复培养:38-40 ℃ 水中 注意防护：防冻，防爆。 Company Logo 1 良好的培养基，新鲜培养的菌种，健壮的菌体，丰满的孢子，适宜的菌龄 2 严格无菌 3 注意保藏菌种的制备质量 4 创造最适宜的保藏条件 菌种保藏注意事项 5 严格控制传代次数 6 恢复培养时，要移接到保藏以前所用的同一培养基进行培养 Company Logo 思考题 1.菌种退化有哪些原因?如何避免? 2.列举出3种微生物保藏法并说出其适用范围 3.作为工业生产用的菌种必须具备哪些条件 ? Company Logo 名词概念  菌种退化 冷冻干燥 复壮 Company Logo Company Logo Company Logo Company Logo Company Logo Company Logo Company Logo Company Logo Company Logo Company Logo Company Logo 微生物发酵工程 2 微生物菌种及其复壮与保藏 Company Logo 复习 现代微生物发酵工程研究的内容 1 菌种的选育和扩大 2 最经济地利用营养物，按需确定培养基 3 灭菌 4 微生物在最优条件下产物的大规模生产 5 发酵产物的提取纯化 6 废物的处理、再生和生产环境的净化 Company Logo 名词概念  初级代谢产物 次级代谢产物 Company Logo  2 微生物菌种及其复壮与保藏 1 工业生产