海洋生物基因工程理论.ppt

基因载体 目的基因 质粒 噬菌体 病毒 PCR cDNA 人工合成 基因文库 限制性内切酶 有切口的载体 有切口的目的基因 DNA连接酶 重组体 转化 转染 体外包装 带重组体的宿主细胞 表型筛选 电泳法 核酸杂交 免疫学方法 目的基因的表达 目的蛋白纯化 　 　 复习思考题： 　1. 概念： （1）克隆 （2）转化 （3）基因工程 （4）限制性核酸内切酶 （5）载体 （6）G文库 （7）质粒 （8）c文库 2. 简述基因工程的基本过程。 3. 简述目的基因的主要来源或途径。 4. 已知某一基因的DNA单链 5?——ATGGGCTACTCG——3? (1)写出DNA复制时另一条单链的核苷酸序列。 (2) 以该链为模板转录成RNA序列。 (3) 合成的多肽序列。 参考密码子： UAC 酪氨酸 CCG脯氨酸 CGA精氨酸 CAU组氨酸 AUG蛋氨酸 AGC丝氨酸 GUA缬氨酸 GCC丙氨酸 5?——ATGGGCTACTCG——3? DNA (1) 3?——TACCCGATGAGC——5? DNA (2) 3?——UACCCGAUGAGC——5? mRNA (3) 5?——CGA GUA GCC CAU——3? N — Arg—Val —Ala —His — C 多肽链 5. 在基因工程中，为了在细菌细胞中表达真核生物的基因产物，为什么通常要用cDNA而不用基因组DNA？为什么要在cDNA前加上细菌的启动子？ 6. 某一质粒基因载体具有Tet抗性和Kan抗性的表型，在Kan抗性基因内有一Bgl ll的切点。先用Bgl ll切割该载体进行基因克隆，问(1)转化后涂皿时应加什么样的抗生素？（2）培养后长出的菌落具有什么样的抗性基因型？ 7.怎样将一个平末端DNA片段插入到EcoRⅠ限制位点中去？ 8.如何以大肠杆菌质粒DNA为载体克隆一个编码蛋白的基因，并使之在大肠杆菌中进行表达？简要说明实验中可能遇到的问题及可能的解决办法。 9.说明合成接头在基因工程中的主要作用 10. 种子在储存过程中发生了某种变化，使得长成的水稻很容易被一种病原菌感染。据推测可能是某一化学诱导的突变导致一个具有抗菌功能的关键酶丢失。请设计一个实验验证这种推测是否正确，如何使种子重新获得对这种病的抗性？提示：根瘤农杆菌具有通过其Ti质粒将细菌DNA带入植物基因组的独特功能。 * Legend: DNA cloning is a technique that allows the wholesale production of a specific DNA sequence. DNA containing a gene of interest is inserted into the purified DNA genome of a self replicating element, which can be a plasmid, a virus or in this case, a yeast artificial chromosome (YAC). A YAC can be considered as a functional artificial chromosome (self replicating element), since it includes three specific DNA sequences that enable it to propagate from one cell to its offspring: TEL: The telomere which is located at each chromosome end, protects the linear DNA from degradation by nucleases. CEN: The centromere which is