基因工程复习2.pptVIP

例3：图甲、乙中的箭头表示三种限制性核酸内切酶的酶切位点，ampr表示氨苄青霉素抗性基因，neo表示新霉素抗性基因。下列叙述正确的是(　　) A．图甲中的质粒用BamH Ⅰ切割后，含有4个游离的磷酸基团 B．在构建重组质粒时，可用Pst Ⅰ和BamH Ⅰ切割质粒和外源DNA C．用PstⅠ和HindⅢ酶切，加入DNA连接酶后可得到1种符合要求的重组质粒 D．导入目的基因的大肠杆菌可在含氨苄青霉素的培养基中生长 步骤 三：将目的基因导入受体细胞 转化——目的基因进入受体细胞内，并且在受体细胞内维持稳定和表达的过程。 将目的基因导入植物细胞的方法 将目的基因导入动物细胞的方法 将目的基因导入微生物细胞的方法 1 2 常用的转化方法 ——Ca2+处理法 ——农杆菌转化法、基因枪法、花粉管通道法 ——显微注射技术 1、目的基因导入植物细胞的方法 ⑴.农杆菌转化法 ①农杆菌特点：易感染双子叶植物和裸子植物，对大多数单子叶植物没有感染能力。 ②原理：Ti质粒上的T--DNA可以转移到受体细胞，并整合到受体细胞染色体的DNA上 ③过程： 构建基因表达载体 转入 农杆菌 植物细胞 导入 稳定维持和表达 2、将目的基因导入动物细胞 ①方法： ②程序 显微注射法 目的基因表达载体提纯 取卵 受精卵 显微注射 新性状动物 移植到输卵管或子宫 3.将目的基因导入微生物细胞 ①微生物作受体细胞原因： ②常用菌： ③常用法： ④过程： Ca2+处理 大肠杆菌 感受态 细胞 感受态细胞 吸收DNA 完成转化 表达载体 与感受态 细胞混合 繁殖快、多为单细胞、遗传物质相对少 大肠杆菌 Ca2+处理获得感受态细胞 步骤四：目的基因的检测与鉴定 导入过程完成后，全部受体细胞都能摄入重组DNA分子吗？ 1 真正能摄入重组DNA分子的受体细胞很少 2 目的基因进入受体细胞后，是否都能稳定维持和表达？ 不一定，需要检测(从分子水平和个体水平) 转化的效率很低 1.鉴定——分子水平的鉴定 转基因生物 的DNA 基因探针 14N 14N ⑴.检测转基因生物染色体的DNA上是否插入了目的基因 基因探针： 人工合成的放射性同位素等标记的单链DNA片段 方法—— DNA分子杂交技术 变性 显示出杂交带 方法—— 分子杂交技术 ⑵.检测目的基因是否转录出了mRNA 转基因生物 的mRNA 显示出杂交带 基因探针 提取 ⑶.检测目的基因是否翻译成蛋白质 ——抗原-抗体杂交 苏云金杆菌 Bt毒素蛋白 将Bt毒蛋白注射小鼠体内 从小鼠血管抽出血液分离出抗Bt毒素的抗体 抗体 蛋白质 出现杂交带 脱分化 组织培养 1.鉴定——分子水平的鉴定 2.鉴定——个体水平的鉴定 抗虫、抗病接种实验，活性比较实验 例：用棉铃饲喂棉铃虫，如虫正常生活，说明未摄入目的基因或摄入目的基因未表达。如虫中毒死亡，则说明摄入了抗虫基因并得到表达。 活动三、基因工程的应用 应用 举例 植物基因工程 ⑴抗虫转基因植物：Bt毒蛋白基因、蛋白酶抑制剂基因、 淀粉酶抑制剂基因、植物凝集素基因等 ⑵抗病转基因植物：用于抗病毒转基因植物的目的基因主要是： 病毒外壳蛋白（CP）基因、病毒的复制酶基因 用于抗真菌转基因植物的目的基因主要是： 几丁质酶基因和抗毒素合成基因 ⑶抗逆转基因植物：抗旱、抗盐、抗寒、抗除草剂等抗逆性。 ⑷利用转基因改良植物的品质：富含赖氨酸的转基因玉米、延熟保鲜番茄等 动物基因工程 ⑴改善畜产品品质： ⑵提高动物生长速度： ⑶生产药物： 乳腺生物反应器----将药用蛋白基因和 乳腺蛋白基因的启动子 等重组，导入到哺乳动物的受精卵中，培育成转基因动物。 ⑷利用转基因动物作为器官移植的供体。 基因工程与人类健康 ⑴基因工程药物：细胞因子、抗体、疫苗、激素等。 ⑵基因诊断(又称DNA诊断)：原理：DNA分子杂交。 ⑶基因治疗：利用正常基因置换或弥补缺陷基因的治疗方法。 实例：1990年，美国进行的ADA基因缺陷症的治疗。 1.蛋白质工程----通过物理化学与生物化学等技术了解蛋白质的结构与功能，并借助计算机辅助设计、基因定点诱变和重组DNA技术改造基因，以定向改造天然蛋白质，甚至创造出自然界不存在的蛋白质的技术。 2.蛋白质工程崛起的缘由：基因工程只能生产 。 3.基本途径：从预期的蛋白质功能出发 → 设计预期的蛋白质结构 → 推测应有的氨基酸序列 → 找到相对应的脱氧核苷酸序列（以上是蛋白质工程特有的途径）。 4.