荧光定量PCR技术在临床诊断中的应用(中山大学)程序.ppt

病毒实验室检测类型-病毒实验室诊断方法 检测抗体/抗原 检测病毒 检测核酸 ELISA/HI/PA 蛋白印迹 病毒分离 ELISA 电镜 中和试验 RT-PCR 实时荧光定量PCR 套式PCR LAMP 免疫荧光 基因芯片 每种方法 各有优势, 依据病毒 来定检测策略 New molecular tools for epidemiology studies and diagnosis 三　结核杆菌与呼吸道病原体检测 TB：Tubercle bacilli CP：Chlamydia pneumonia MP：Mycoplasmal pneumonia SARS：severe acute respiratory syndrome H1N1甲型流感 呼吸道合胞病毒 ＥＢ病毒 Ｈ７Ｎ９禽流感病毒（２０１３.０５.２１） 结核杆菌流行现状（1） 罗伯特·科赫（１８４３——１９１０），德国细菌学家，结核杆菌发现者 结核病是一个全球性的问题，近年来在世界范围内出现流行，且呈增长的趋势 TB 结核杆菌流行现状（2） 我国结核病的疫情仅次于印度而居世界第二位 2000年，全国人口结核感染率为44.5%，其中15～44岁人群占了53％ ，每年约有25万人死于结核病 结核杆菌引起的感染 肺部感染：原发性肺结核，开放性肺结核。 肺外感染：脑、肾、骨、关节、生殖结核、肠结核、结核性腹膜炎、全身性结核。 常规结核病实验室诊断方法及不足 1. 痰涂片作抗酸染色：阳性率低 、费时 2. 细胞培养“金标准”：周期太长(3-4W) 3. 血清学诊断： a. 接种BCG可出现阳性 b. 不能区分活动性结核病和治愈后留下损伤灶的病人 c. 交叉反应，假阳性 不能早期诊断！容易漏诊、误诊！ TB 荧光定量PCR检测TB-DNA的意义 1. 能稳定检测10copy的TB-DNA ，灵敏度高 ，特异性强 2. 早期、快速、准确地诊断结核病。 痰液、肺及支气管灌洗液——肺结核 血液——播散性结核和各脏器的结核病 　 脑脊液——中枢神经系统结核病 宫颈拭子、尿道拭子——泌尿生殖道结核病 TB 3. 荧光定量PCR检出结核杆菌阳性率显著高于痰涂片抗酸染色和改良罗氏培养法。 4. TB-DNA浓度可用于判断疗效： 痰标本中结核杆菌的数量呈逐渐下降趋势 ，TB-DNA拷贝数下降。根据病原体DNA浓度，对药物治疗及疗效观察提供参考依据 TB 荧光定量PCR检测TB-DNA的意义 CP、MP感染可致咽炎、支气管炎和肺炎，潜伏期约2-3周，通常起病较缓慢。持续性咳嗽。 肺炎衣原体(CP)、肺炎支原体(MP)感染与致病 CP/MP MP肺炎约占非细菌性肺炎的1/3以上，或各种原因 引起的肺炎的l0％。 MP感染与小儿支气管哮喘密切相关。 CP感染与冠心病存在密切的关系 肺癌、支气管扩张患者中CP感染率相对较高 荧光定量PCR用于非典型性肺炎的诊断 意义：1. 直接检测病原体，早期、快速、特异诊断非典 型性肺炎。 2. 治疗方案与细菌、病毒感染的治疗方案不同 3. 流行病学调查。 　TB、MP、CP已被许多医院尤其是妇幼保健医院和儿童医院纳为肺部感染的常规检测项目 MP/CP/SARS 甲型H1N1流感 流行性感冒简称流感，是由甲、乙、丙三种流感病毒引起的急性呼吸道传染病。甲型流感病毒根据其表面(H和N)结构及其基因特性的不同又可分成许多亚型，至今甲型流感病毒已发现的血凝素有16个亚型(H1-H16)，神经氨酸酶9个亚型(N1-N9)。 艾滋病 艾滋病是英文AIDS（Acquired Immunity Deficiency Syndrome) 的中文译音，全称是“获得性免疫缺陷综合征”。它可以由人类免疫缺陷病毒（HIV,Human-being Immunity Deficiency Virus ），又称艾滋病病毒引起的疾病。当病毒侵入人体后，经一段时间的潜伏期，破坏人体的免疫力，从而发病，病死率高，是一种严重的传染病。 艾滋病是一种有明确病原体的可通过人之间一定传播途径传播的慢性传染病，属于《传染病防治法》中规定的乙类传染病 HIV病毒：多亚型和多变异 HIV-1和HIV-2 M组、O组和N组 亚性型：A-K CRF：基因重组亚型，主要是HIV-1型 毒株亚型监测的意义 不同亚型与不同传播