兔抗hnRNP B1多克隆抗体的制备、纯化及验证 毕业论文.docVIP

本科生毕业论文（设计） 题　　目 兔抗hnRNP B1多克隆抗体的制备纯化及验证 姓　　名 学号 2010413102 院　　系 生命科学学院 专　　业 生物工程 指导教师 职称 副教授 2014年 5月17 日 曲阜师范大学教务处制 目录 摘要 1 关键词 1 Abstract 1 Keywords 1 1.引言 1 1.1 hnRNP的结构与功能 1 1.2 hnNPs与肿瘤疾病发生发展的机制研究进展 2 1.3 关于hnRNP B1 2 1.4多克隆抗体 3 1.5 间接竞争ELISA法 3 1.6 抗体的分离纯化方法 3 2材料与方法 4 2.1 材料与仪器 4 2.2 主要试剂 4 2.3 兔抗人hnRNP多克隆抗体的制备 5 2.3.1 抗原准备 5 2.3.2 取空白血清 5 2.3.3 动物免疫 5 2.3.4 多抗血清效价的检测 5 2.3.5 间接非竞争ELISA检测方法 5 2.4 兔抗人hnRNP多克隆抗体的纯化 5 2.5 western bloting对兔抗hnRNP B1多抗的验证 6 2.6免疫沉淀对兔抗hnRNP B1多抗的验证 7 2.7免疫组化对兔抗hnRNP B1多抗的验证 7 3.结果与分析 8 3.1 兔抗hnRNP B1多抗的效价及纯化产量 8 3.2兔抗hnRNP B1的western验证 8 3.3兔抗hnRNP B1的免疫沉淀验证 9 3.4兔抗hnRNP B1多克隆抗体的免疫组织化学表达 9 4讨论与展望 10 参考文献 10 致谢 11 兔抗hnRNP B1多克隆抗体的制备、纯化及验证 摘要：目的：自主制备抗hnRNP B1多克隆抗体，将其纯化并验证多抗的特异性 。方法：以自行设计的偶联多肽hnRNP B1为抗原免疫新西兰成年兔制备兔抗hnRNP B1多克隆抗体，用间接非竞争ELISA的方法测定效价后进行亲和层析，将纯化后的多抗用western、免疫组化、免疫沉淀的验证方法进行鉴定并验证其特异性。结果：经偶联多肽免疫动物后，ELISA检测抗血清效价为1:10000，用亲和层析法进行纯化得到A兔34mg、B兔41mg的抗体，western以及免疫沉淀分析在37KD有清晰条带，为hnRNP B1蛋白。免疫组化分析在光学显微镜下观察到hnRNP B1 阳性反应产物呈棕黄色，颗粒状。 结论：成功制备兔抗hnRNP B1多克隆抗体经ELISA效价测定具有较高纯度；经western、免疫沉淀、免疫组化验证具有较好的特异性，可以满足实验要求，为进一步研究hnRNPA2/B1相互作用蛋白的种类鉴定以及相互作用蛋白网络的构建提供基础。 关键词：多克隆抗体、不均一性核糖核蛋白B1、ELISA、免疫亲和层析、western blotting The preparation、purification and verification of rabbit anti hnRNP B1 polyclonal antibody. Student majoring in Bioengineering Liu Yu Tutor Liu Jinfeng Abstract:Objective:To prepare anti-hnRNP B1 polyclonal antibody and purify it,then verify its specifiction with various of methods.Methods: We use designed coupling polypeptide hnRNPB1 as antigen immuning adult New Zealand rabbit,which is a way of preparation of rabbit anti hnRNP B1 polyclonal antibody. After deternmining the potency of polyclonal antibody with the indirect non competitive ELISA method, use affinity chromatography method to make a purification.Then we make a validation which use methods of wes