免疫亲和柱讲义.ppt

真菌毒素免疫亲和柱的应用 报告人：尹丽梅 北京华安麦科生物技术有限公司 公司网址： 目 录 免疫亲和柱 1、Toxin Fast系列产品介绍 真菌毒素免疫系列产品 酶联免疫试剂盒 胶体金快速检测卡 真菌毒素免疫检测耗材及设备 微纤维滤纸 光化学衍生器 荧光分析仪 中文名称 英文名称 规格 黄曲霉毒素B1 Aflatoxin B1 1/5/10/20/30/40/50mg 黄曲霉毒素B2 Aflatoxin B2 1/5/10mg 黄曲霉毒素G1 Aflatoxin G1 1/5/10mg 黄曲霉毒素G2 Aflatoxin G2 1/5/10mg 黄曲霉毒素M1 Aflatoxin M1 0.1/1mg 黄曲霉毒素M2 Aflatoxin M2 0.1/1mg 呕吐毒素(DON) Deoxynivalenol 1/5/10mg 伏马毒素B1 Fumonisin B1 1/5/10mg 伏马毒素B2 Fumonisin B2 1/5/10mg 赭曲霉毒素A Ochratoxin A 1/5/10mg 玉米赤霉烯酮 Zearalenone 1/5/10mg T-2 毒素 T2 Toxin 1/5/10mg 桔青霉素/桔霉素 Citrinin 1/5/10mg 棒曲霉素/展青霉素 Patulin 1/5/10mg 真菌毒素标准品 产品名称 规格 柱容量 黄曲霉毒素总量免疫亲和柱 1ml/3ml 300ng 黄曲霉毒素B1免疫亲和柱 1ml/3ml 300ng 黄曲霉毒素M1免疫亲和柱 1ml/3ml 100ng T-2毒素免疫亲和柱 1ml/3ml 5000ng 呕吐毒素免疫亲和柱 1ml/3ml 5ug 玉米赤霉烯酮免疫亲和柱 1ml/3ml 1250ng 赭曲霉毒素免疫亲和柱 1ml/3ml 300ng 伏马毒素免疫亲和柱 1ml/3ml 5000ng 免疫亲和柱系列产品 产品应用领域：药检所、质检所、疾控中心、出入境、饲料集团公司 抗体（Antibody）特异性示意图 2、免疫亲和柱的原理 IAC 洗脱 上样 洗涤 抗体 待测物 无关杂质 固相载体 ① ② ③ IAC柱的原理 2、免疫亲和柱的原理 样品前处理 亲和柱纯化 HPLC检测 过滤除杂 黄曲霉毒素亲合柱举例 25g样品 5gNaCl 125mL 60%甲醇 摇床提取 200rpm,20min 提取液 稀释液 滤液 微纤维滤纸 亲合柱净化 HPLC检测 3.1 样品前处理 3、免疫亲和柱的使用 1:1 3-1 气控操作架的安装图 3. 2 气控操作架安装 5.去掉下方堵头 4.上样 6.流速1-2d/s 7.排干 8.10ml蒸馏水洗涤 10.排干 11.1ml甲醇洗脱 12.引流 1.安装针筒 2.斜剪断塞子 3. 连接 9.流速(2-3)d/s 3.3 免疫亲合柱的使用 储存温度（2~8℃） 使用温度和流速 样品处理 提取的试剂： 溶剂比例 提取方式： 高速均质或振荡提取 稀释至上样浓度：低浓度有机溶剂 过滤： 微纤维滤纸，1.5μm孔径 使用前注意回温 3.4 免疫亲合柱的注意事项 Whatman 934-AH 3.5 AFB1免疫亲合柱—HPLC图谱 图3-1 黄曲霉毒素B1(10ppb)HPLC图 图3-2 FAPAS 玉米样本中AFB1 HPLC图 6.4ppb 3.5 AFT免疫亲合柱—HPLC图谱 G2 3ppb G1 10ppb B2 3ppb B1 10ppb 图3-3 黄曲霉毒素B1B2G1G2混标HPLC图 图3-4 广西粮油站玉米样本黄曲霉毒素HPLC图 B1 134ppb 图3-5 花生饼样本黄曲霉毒素HPLC图 3.5 ZEN免疫亲合柱—HPLC图谱 3-5 玉米赤霉烯酮（ZEN） 1000ppb标品液相谱图 3-7 牛精补料中玉米赤霉烯酮 HPLC图 458ppb 3.6 DON免疫亲合柱—HPLC图谱 3-8 呕吐毒素（DON） 1000ppb标品液相谱图 3-9 山西粮食检测中心玉米样本DON HPLC图 321ppb 用于HPLC分离柱和检测器之间， 提高荧光、紫外、电化学检测和化学发光检测器的灵敏度或响应的选择性。 4、光化学衍生器 * 为什么要衍生？ 衍生前 衍生后 黄曲霉毒素混标B1,B2,G1,G2液相图 衍生可以增强B1、G1的荧光强度。 AFB1 AFG1 衍生后 衍生后 AFB2 AFG2 光化学衍生的原理 * 衍生种类 对比项 柱后衍生 柱前衍生 光化学衍生器 电化学衍生器 无需化学试剂，操作安全 √ × × 增加HPLC仪器寿命（无腐蚀性液体） √ × × 无需冲洗步骤 √ × × 无衍生温度要求，操作便捷 √ × × 通过衍生