免疫层析诊断试剂中的标记物.pdf

漫谈免疫层析诊断试剂中的标记物 前言 免疫层析诊断试剂是根据免疫学原理、利用大孔径微孔滤膜为载体、通过固 相标记物来定性、半定量或定量检测样本中待测物质含量的一种侧流快速检测技 术。由于其最符合WHO关于理想诊断试剂ASSURED （见附）的标准，自80 年 代末、90 年代初以来已经得到了很大的发展。表现在：1.检测项目越来越多；2. 检测范围越来越广； 3.检测样本种类越来越多；4.标记物种类越来越丰富； 5. 检测灵敏度越来越高； 6.从单一检测发展到多元检测； 7.从定性发展到半定量、 定量检测。勿容置疑，提高检测灵敏度、定量检测以及多元检测是免疫层析技术 发展的三个方向。尤其是检测灵敏度不高是限制免疫层析诊断技术发展的最主要 技术障碍。但三者的发展均与标记物的发展息息相关，因此，可以说，免疫层析 诊断试剂的发展主要表现在标记物的发展上。没有标记物的发展，多元检测、灵 敏度的提高以及定量检测都不可能实现。在免疫层析诊断试剂中，理想的标记物 应具备以下条件： 1．灵敏度高；灵敏度一般要达到ng级，甚至pg和甚至fg级，而且标记物容易被 简便快速、价廉的检测系统检测到。 2 ．结合特性好； 标记物应不影响抗体或抗原的免疫活性、亲和力和特异性， 不减少免疫反应信号的产生。另外，标记和纯化的方法比较简单。 3 ．均一性好，制作方便； 4 ．稳定性好； 标记物必须对样本中的可能影响物质，如、酶类、有色物质、 淬灭物质等不敏感，才能保证标记试剂在较长时期内的稳定储存，减少批间 和批内差。 5 ．环境因素的不敏感性； 标记物对环境中的光、温度以及样本中缓冲液、温 度或PH等变化不敏感。 6 ．安全性好；标记物必须无毒、安全、无危险、无废物处理问题。 7 ．应用性好；标记物必须来源方便，标记反应温和，容易得到理想结果和重 复性好，能广泛应用于临床和研究。 “人无完人，金无足赤”，目前尚未发现完全符合上述要求的标记物。本文将 就免疫层析诊断试剂中使用的标记物做逐一介绍。由于尚无使用相同材料来比较 诸多的标记物，因此无法用同一种待测物比较检测灵敏度。涉及文献,恕不列举。 • Affordable by those at risk of infection. • Sensitive (few false-negatives). • Specific (few false-positives). • User-friendly (simple to perform and requiring minimal training). • Rapid (to enable treatment at first visit) and Robust (does not require refrigerated storage). • Equipment-free. • Delivered to those who need it. 斧正交流：gw368pumc@126.com 一．酶 在免疫层析诊断试剂的开发早期，酶的使用最广泛。由于早期试剂装置比较 简单，酶和底物溶液仍然需要在4 ℃保存，无法达到一步法，导致产品使用步骤 多，产品运输和储存需要冷链，逐渐退出研究者的视线。但由于酶具有信号放大 作用、灵敏度高，在检测高致病生物时，用处较大，最近又重新进入研究者的视 野。尤其值得一提的是，由于试剂装置的改近，现在几乎已经可以达到一步法。 如下图的反方向免疫层析装置，其将底物装入底物池储存池（有的还设计有洗涤 液储存池），加入样本后，用力按压使底物池储存池破裂，从而释放底物参与反 应。目前使用的多为HRP 和ALP 。 图 日本Fujirebio设计的酶反应装置图 图 日本Fujirebio测定SARS-CoV产品实物图 优点： 1．检测灵敏度高；如使用ALP检测IgE 0.2 U/ml ，胶体金法为4 U/ml ，灵敏度提 高20倍。检测SARS-CoV N抗原灵敏度可达31pg/ml 。 2 ．标记方法成熟。不仅可以标记生物大分子，还可以标记小分子。在检测小