创新基金申请书之研究方案.docVIP

安 徽 农 业 大 学 大学生科技创新基金项目 申 请 书 项目名称： 申 请 者： 所在单位： 联系电话： 申请日期： 安 徽 农 业 大 学 教 务 处 二零一零年印制 简表 项目名称 项目类别 申请金额 经费类别 （①校资助②学院教师资助③自筹） 起止年月 申请者 姓名 性别 出生年月 专业 年级 联系电话 项目组成员 姓名 年龄 专业·年级 项目中的分工 签名 研究内容和意义摘要 主题词 立论（包括项目的研究意义及国内外现状分析） 研究方案（包括主要研究内容、研究方法和技术路线,拟解决的关键问题及预期进展、研究成果等） 1.主要研究内容 1)从茶树基因组文库中获得茶树基因组序列。 2)使用SSRFINDER软件寻找SSR位点，采用primer5.0软件根据SSR的侧翼序列设计特异SSR引物。 3)优化CTAB法，提取适合SSR分析的茶树基因组DNA模板。 4)优化茶树SSR-PCR反应体系和反应条件。 5)筛选多态性SSR引物，获得茶树特异性的SSR标记，构建茶树SSR指纹图谱 6)应用多态性SSR引物对茶树种质资源进行遗传多样性分析。 2.研究方法 根据序列，使用SSRFINDER软件寻找茶树基因组中重复序列位点，并获得其侧翼序列。然后使用primer5.0软件根据重复序列位点的侧翼序列来设计特异性引物。优化传统的CTAB法提取高质量的茶树基因组DNA。优化SSR-PCR的反应体系中模板DNA的浓度、引物的浓度、Taq酶的用量和dNTP的浓度以及PCR反应条件中的变性温度和时间、退火的温度和时间、延伸的温度和时间、循环数等条件。筛选出能扩增出清晰明亮的特异性条带，且杂带少的引物。然后经过变性聚丙烯酰胺凝胶电泳，银染，拍照并统计条带。筛选出多态性高、重现性好、特异性强的SSR引物。然后进行数据统计，使用软件分析这茶树品种的遗传多样性。SSR分子标记的开发需要消耗巨大的人力、物力和财力，而且多态性高、重复性好的SSR分子标记的引物得率很低。这是在SSR分子标记开发中难以避免的问题。完成试验核心内容