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* Column and elpho conditions: Column: GSTrap 1 ml Sample: 8 ml cytoplasmic extract from E. coli expressing a GST fusion protein Binding buffer: PBS, pH 7.3 Elution buffer: 50 mM Tris?-HCl, pH 8.0 with 10 mM reduced glutathione Flow rate: 1 ml/min Chromatographic procedure: 4 CV binding buffer, 8 ml sample, 10 CV binding buffer, 5 CV elution buffer, 5 CV binding buffer (CV = column volume) System: ?KTA?explorer 10 Lane 1: Low Molecular Weight (LMW) Calibration kit, reduced, Amersham Pharmacia Biotech Lane 2: Cytoplasmic extract of E. coli expressing GST fusion protein, 1 g cell paste/10 ml Lane 3: GST fusion protein eluted from GSTrap 1 ml * * Column and elpho conditions: 样品: 5 ml大肠杆菌表达含(His)-标记谷胱甘肽转移酶， GST-(His)6 柱: HiTrap Chelating 1 ml, 加 Ni2+ 结合缓冲液: 1X 磷酸缓冲液, 20 mM 咪唑 pH 7.4 洗脱缓冲液: 1X 磷酸缓冲液, 500 mM咪唑 pH 7.4 流速: 2 ml/min, 312 cm/h 结果: 洗脱 GST-(His)6, 4 ml, A280: 1.65 总量: 4.46 mg 1: 低分子量标记 (LMW) 2: 样品稀释 1:20 3: 穿透稀释 1:10 4: 冲洗液 5: 洗脱 GST-(His)6,稀释 1:20 6: 洗脱 GST-(His)6,稀释 1:10 7: GST 标准品, 0.5 mg/ml 8: LMW * * Gel: PhastGel? Gradient 10–15 Sample Dilution pretreatment: 1:5 with 15% SDS, 30% 2-mercaptoethanol, 10 mM Tris, 1 mM EDTA Sample volume: 1 μl Staining: Coomassie, according to the manufacturer’s standard protocol Instrument:: PhastSystem? Column: Superdex? 75 HR 10/30 (VT: 24 ml) Sample: 0.2 ml purified and refolded N-terminal (His)6-tagged recombinant protein eluted from HiTrap? Chelating 1 ml Buffer: 0.15 M NaCl Flow rate: 0.5 ml/min Fraction volume: 1 ml Instrument: FPLC?System * 4.2 吸附型层析复性：离子交换、疏水层析、亲和层析和扩张床层析均属于吸附层析。其基本复性原理是层析柱平衡后，将变性蛋白上样并吸附在凝胶介质上，然后用清洗缓冲液洗掉未吸附的变性剂和杂蛋白，最后用复性缓冲液将吸附的蛋白洗脱下来，在洗脱过程中完成复性。 Solid-Phase (or Matrix-assisted) Refolding IB in E. coli IB(solid) Solubilized IB (unfolded) Aggregate Refolded Bioactive monomer Refolding Solution-state F Solid Support Solid-state refolding F 5.分子伴侣：主要包括硫氧还蛋白二硫键异构酶、肽酰一辅氨酰顺反异构酶等。分子伴侣和折叠酶等不仅可在细胞内调节蛋白质的折叠和聚集过程的平衡，而且可在体外促进蛋白质的折叠复性。 体内复性主要是
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