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T7DNA聚合酶（测序酶） ? 来源：T7 Phage 感染的 E.coli ? 结构：由 2 个蛋白亚基组成： T7 phage gene 5 蛋白 + 宿主硫氧蛋白 活性： 5′→3′聚合，持续反应时间最长，所以合成的 DNA 链长。故在 DNA 测序中很优越。 3′→5′外切，是 DNA 聚合酶Ⅰ的 1000倍。 用途 复制较长的模板，在测序中可读出较长的序列 用填补或交换反应快速进行末端标记。 ? 与 T４DNApol一样，平齐粘性末端。 定点突变中互补链的合成。 5′ 3′ 3′ 5′ 修饰的 T7DNA 聚合酶(测序酶) ?来源： 天然 T７DNA 聚合酶经修饰处理 ?结构： 同T７聚合酶。 用还原剂、分子氧、低浓度 Fe２+与酶保温几天，可使Phage T7 gene5 蛋白 N- 端3′→5′外切酶活性中心失活 (O- 修饰)。 即：5′→3′聚合酶作用提高，持续性长。3′→ 5′外切作用下降 99% 以上。 Taq DNA 聚合酶(Thermusaqraticus) ?来源：从耐热细胞中纯化，已有基因工程酶多种 ?结构：单亚基 MW = 94,000 d。 ?活性：聚合最适温度为 75-80℃，不具3′→5′外切酶活性，具5′→3′外切活性 。 ?用途： PCR 反应。 测序，高温下进行 DNA 合成可减少模板二级结构。 末端转移酶 (不依赖模板的 DNA 聚合酶) ??来源：只在前淋巴细胞和淋巴细胞分化早期阶段中存在的罕见的 DNA 聚合酶 (Chang 和Bollum,1986)。 ??结构 ：MW = 60,000 d. ??活性：催化 dNTP 掺入 DNA 3′-OH 末端，形成同聚物末端；反应不需模板 DNA，需 Co2+ 用途： 克隆DNA片段时加上互补同聚物末端，便于与载体连接。 末端标记 反转录酶(reverse transcriptase) 来源：商品反转录酶有两种 来自禽类成髓细胞瘤病毒 (AMV)。 来自能表达 Moloney 鼠白血病毒(M-MLV)反转录酶基因的 E.coli。 结构和活性： + + 84，000 M-MLV +++ + α62，000 β94，000 AMV RNAseH 5’-3’聚合活性 肽链 酶类别 ?用途： 对 RNA:DNA 杂交体中的 RNA 特异性地降解，免除了在反转录完成后再用 NaOH 降解 RNA 模板的步骤。 来源 T7、T3RNA 聚合酶在 E.coli （或细菌）中的克隆表达。 E.coli RNA 聚合酶。 活性：在 DNA 指导下合成 RNA，结合于启动子部位，转录无意义链 (一) 产生与有意义链相似 (以U代替模板中 T) 的链。 转录链为无意义链，负链 (-)。  不转录链为有意义链，正链 (+)。 RNA 聚合酶（RNApolymerase） ?磷酸激酶催化 5’-OH 加 P （标记） ?和磷酸酶去除 5’- P （防止自身环化） PNKase PMase 5′HO A T T A G C ……… C C G T A A T C G ……… G G C OH 5′ 多核苷酸激酶 磷酸甲酯酶 Phosphomonoesterase 5′p A T T A G C ……… C C G T A A T C G ……… G G C p 5′ 磷酸激酶和磷酸酶 核酸酶（nuclease） ? Bal13 核酸酶 从 DNA 末端同时降解两条链。 用于基因表达调控序列的研究。 S1 核酸酶 降解单链核酸。 用于把具粘性末端的 DNA 变为平齐末端 的 DNA。 在 DNA 部分变性条件下，能在富含 AT 区切断 DNA。 核酶（ribozyme） 具有酶活性的 RNA片段。 是真核生物转录产物地内含子本身含有的前导序列，能在离体条件下特异地催化内含子剪切。 1981 Cech 和 Altman 首次发现，并因此获得1989年的诺贝尔奖。 核酶可以作为 RNA 的限制性内切酶用于基因操作。 end 人有了知识，就会具备各种分析能力， 明辨是非的能力。 所以我们要勤恳读书，广泛阅读， 古人说“书中自有黄金屋。 ”通过阅读科技书籍，我们能丰富知识， 培养逻辑思维能力； 通过阅读文学作品，我们能提高文学鉴赏水平， 培养文学情趣； 通过阅读报刊，我们能增长见识，扩大自己的知识面。 有许多书籍还能培