3130XL简明使用手册.docVIP

AppliedBiosystems 3130/3130XL 简明使用手册 DATA COLLECTION V3.0 美国应用生物系统公司中国公司 一．DNA 测序或片段分析的流程： 1.样品制备： 样品制备即是在DNA片断上用化学的方法标记荧光素。 标记上荧光素后就可以对DNA片断进行检测和确认了，一般每一 DNA分子标记一个荧光素分子，最多有五种荧光素可用于DNA样品的标记。 不同的样品制备方法选用不同的荧光素和试剂的组合，样品制备可在96孔或384孔板进行 2.软件设置： 操作人员根据所使用的标记方法、电泳的毛细管长度、电泳胶的种类等，在数据采集 Data Collection 软件中选择正确的运行模块和分析模块。 3.开始运行： 操作人员把样品板放到仪器上并开始运行，仪器便会根据设定好的顺序，用相应的电泳程序分析样品板上的样品。 4.电泳： 用“电进样”的方法将带电的样品分子加到灌好电泳胶的毛细管的进样端（负极）， 然后在毛细管两端加上直流电压，样品中不同大小的DNA片段开始从负极向正极移动， 移动的速度受到片段自身大小影响，片断越短移动得越快。电泳的结果是使长度不同的 带电 DNA 片断互相分离，并且按片段的长短的顺序通过检测窗口，产生信号，短片段先到达检测窗口。 5.激发和检测当标记有荧光素的DNA片断移动到检测窗口时，荧光素受到激光束的激发而产生荧光信号，此荧光信号被CCD检测器所检测并被转化为电信号传递到计算机。数据采集和处理CCD检测器把检测到的荧光信号转换为电信号，并把它传送给安装了Data Collection软件的计算机工站。工作站接收到信号后，用预先设置好的方式进行初步处理，并把这些数据存贮在计算机的数据库里。 7.自动数据提取和分析接着工作站会自动地从数据库中提取这些数据，并根据不同的运行模式，完成对样品DNA的碱基序列或片断信息的分析，然后把分析完成后的结果数据以样品文件的形式保存于计算机的硬盘中。结果分析好的样品文件可以用序列分析软件或片断分析软件来打开查看结果，如有必要，这些数据可以改用不同的分析参数进行重新分析。 电泳信号图的X轴表示时间，Y轴表示相对荧光强度，图上不同颜色的信号线代表了样品制备时所使用的不同的荧光素图中的每个峰代表一个DNA片断。 测序样品的结果图 片断分析的结果图 二．仪器硬件结构： 1.仪器前视图： 泵胶块 胶管 胶瓶 阳极缓冲液杯 胶泵（PDP） 3.仪器后视图： 注意：请保持激光冷却风扇的出口通畅！ 三．实验操作： 1.仪器准备： 开机：开机的顺序一定是先开电脑再开仪器。 开启UPS电源，确保UPS处于电池供电状态，稳定5分钟； 打开显示器和电脑的电源开关，登录到WIN XP桌面； 检查确保仪器的加热炉门和仪器左右前门； 打开仪器电源开关，仪器进行一系列的初始化后，绿色状态灯亮，仪器启动完成。 仪器的状态指示灯的不同状态显示了仪器处于不同的工作状态，具体请参考下表： 状态 指示灯 操作 仪器已就绪 关门状态下进行向导 操作 绿灯长亮 继续实验 程序运行中 绿灯闪烁 仪器与电脑无法联机 黄灯长亮 确认已进入WIN XP界面 确认网线连接正确 确认前门关闭 仪器下载firmware 仪器自检 加热炉门打开 前门打开 开门状态下进行向导 操作 黄灯闪烁 确认前门，加热炉门已关闭 故障 红灯长亮 关机后等待30秒后开机 若上一步无效则打开DC3.0软件，进入以 下界面 GA Instruments ga3130 instrument name Instrument Status Event Log. 查看日志中最后一条信息， 根据相应错误代码来解决问题 若依然无法解决问题，联系ABI工程师 打开Data Collection3.0软件： 选择Start Programs Applied Biosystems Data Collection Run Data Collection v3.0. 或双击桌面快捷方式。 等待Service Console窗口中的指示灯全部变成绿色后，DC软件的界面打开，过程如下： 冲洗Water Seal： 在20ml的注射器里装上20ml去离子水（水温40oC以下），将注射器装到右图中2号的位置； 将1号和2号位上的螺母都放松1/2圈； 用烧杯在1号口底下接收流出来的水，然后慢慢地压注射器，使水通过Water Seal后从1号口流出，要求使用水的体积在10ml以上； 拧紧2号位上的螺母，再拧紧2号位上的螺母； 取下20ml注射器，冲洗步骤完成。 安装毛细管： 在DC软件中，选择 GA Instruments ga3130 instrument name . 在工具栏中，选择 Wizar