第3章高效液相色谱分析祥解.ppt

* 2.甘油三酸酯的分析 四种组分仅双键数目和位置不同，难分离； 色谱柱：DB-225 SFC毛细管柱； 流动相： CO2 ；从15MPa程序升压到27MPa；2.5hr完全分离。 * 第七节 毛细管电泳（Capillary electrophoresis，CE） 一、概述 在外加电场的作用下，带电的胶体粒子或离子在分散的介质中作定向移动（泳动）的现象称为电泳。 不同带电粒子由于荷电量不同，分子的大小不同，泳动的速度也就不同，因此、电泳是一种适合于带电胶体粒子和离子的分离分析技术。 电泳现象：带电离子在电场作用下的迁移，速度 电渗流现象：玻璃表面存在硅羟基, pH＞3时, 形成双电层，在高电场的作用下引起柱中的溶液整体向负极移动，速度 。 * 分离过程 电场作用下，柱中出现：电泳现象和电渗流现象。 带电粒子的迁移速度=电泳和电渗流两种速度的矢量和。 正离子：两种效应的运动方向一致，在负极最先流出； 中性粒子无电泳现象，受电渗流影响，在阳离子后流出； 阴离子：两种效应的运动方向相反， 时,阴离子在负极最后流出,在这种情况下,不但可以按类分离,除中性粒子外,同种类离子由于受到的电场力大小不一样也同时被相互分离。 * 高效毛细管电泳仪器（1） * 高效毛细管电泳仪器（2） * 高效毛细管电泳仪器（3） * 三维毛细管电泳系统 （Agilent CE，美国Agilent公司） 高效毛细管电泳仪器（4） * 特点： 使用散热效率很高的毛细管（25~50μm）可以减少电泳时产生的焦耳热而导致的区域展宽，因而可以采用较高的电压（20~30kV），有利于获得很高的分离效率，每米塔板数可达几十万，高者可达106，分析时间一般小于30min，试样分析范围宽，检测限低。进样量少，可达nl级，极微量的成分也可检出，且样品无需进行复杂的前处理，就可分离分析。 高分辨率：理论塔板数高达数百万块，甚至数千万块。 高灵敏度：可检测出低至10-21 mol/L浓度的物质。 高分析速度：可在3分钟内分离30种阴离子；1.7分钟分离19种阳离子；4分钟可分离10种蛋白质. 试样用量少：仅需几nL（10-9 L）的试样 仪器简单，操作成本低：分析一个试样仅需几毫升流动液。 * 应用范围：  在中、西药物等分析领域广泛地被应用，同时也广泛地向生命科学领域的各个方面渗透，大量用于氨基酸、蛋白质、肽、低聚核苷的分离，对糖蛋白、糖肽型化合物的研究也正在进行之中。其中生物碱、有机酸等所有带电或不带电的化合物均可进行定量检测,蛋白质、糖肽、糖蛋白则可得到很好的分离分析。 * 二、构造 主要包括高压电源、毛细管、检测器和贮液槽四个部分。 * 三、CE的分离模式 1、毛细管区带电泳（capillary zone electrophoresis CZE） 2、毛细管凝胶电泳（capillary gel electrophoresis CGE） 3、胶束电动力学毛细管电泳（micellar electrokinetic capillary chromatography，MECC或MEKC） 4、毛细管等电聚焦（capillary isoelectric focusing CIEF） 5、毛细管等速电泳（capillary isotachoporesis，CITP） 6、毛细管电渗色谱（ capillary electroosmotic chromatography，CEC) 种类较多，实际应用不多，多用于科学研究 ——主要原因重现性不高 * * 第八节 薄层色谱法 TLC （一）概述 1．定义：将固定相均匀涂布在表面光滑的平板上， 形成薄层而进行色谱分离和分析的方法 2．操作过程： 铺板 →活化 →点样 → 展开 →定位(定性)/洗脱(定量) 3．分离机制：吸附（分配，离子交换，空间排阻） 4．特点：分析快速、灵敏、显色方便 5．应用：药物杂质检查、纯度测定 * * （二）定性参数 1. 比移值Rf Rf与K有关，即与组分性质（溶解度）以 及薄层板和展开剂的性质有关 色谱条件一定，Rf只与组分性质有关，是 薄层色谱基本定性参数，说明组分的色谱保 留行为。 * 1） K↑大，Rf↓小 2）薄层板一定，对于极性组分 展开剂极性↑大，Rf↑大（容易洗