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肝功能实验设计 一、中英文摘要 Abstract: …Objective: Application of biochemical tests of liver function be checked. ….Activity :1.Lai improved method for measuring serum alanine aminotransferase ammonialyase (ALT) 2.Direct color hypochlorite ammonia determination3. Continuous enzyme reaction cycle (liquid two-reagent method) determination of total bile acid (Total Bile Acid, TBA) 二、实验设计1. 肝功能检查项目的选择 （1）丙氨酸氨基转移氨酶(ALT) ALT主要存在于肝细胞浆内，其细胞内浓度高于血清中1000-3000倍。只要有1%的肝细胞坏死，就可以使血清酶增高一倍,肝脏发炎时，ALT就会从肝细胞释放到血液中，因此，ALT被世界卫生组织推荐为肝功能损害最敏感的检测指标 故测定ALT的活性，能很好反映肝功能的情况 （2）血清氨 血氨的主要来源是氨基酸的分解代谢。肝脏是体内利用氨合成尿素的惟一器官,在肝硬化、重症肝炎、原发性肝癌、肝性脑病,肝脏清除氨的能力下降,血氨会升高,过度增高可引起肝性脑病,对严重的肝病和肝性脑病有很好的协助诊断作用， 故它的测定具有重要的临床意义。 （3）总胆汁酸(Total Bile Acid, TBA) 人急性肝炎急性期患者的TBA测定的异常率达100%,平均增高幅度可达正常高限的10倍，。慢性活动性肝炎的TBA增高幅度较大。而慢性迁延性肝炎的TBA大多在正常范围。肝硬化患者的TBA平均水平是正常高限的5倍，其异常率高于所有其它肝功能试验。血清TBA测定对肝外胆管阻塞和肝内胆汁淤积的诊断有较高的灵敏度，包括胆道阻塞、胆汁性肝硬化、新生儿胆汁淤积、妊娠性胆汁淤积，血清中TBA均可显著增高 2. 肝功能检查测定方法的选择 指标1: 丙氨酸氨基转移氨酶 (ALT) 活性 方法: 血清丙氨酸氨基转移氨酶(ALT)活性的测定 （改良赖氏法） 指标1: 丙氨酸氨基转移氨酶活性 方法: 血清丙氨酸氨基转移氨酶(ALT)活性的测定（改良赖氏法） 仪器： 723型分光光度计 电热恒温水浴箱 高速离心机 试剂： 1. 0.1mol/L pH7.4磷酸盐缓冲液 2. 标准丙酮酸（含丙酮酸2.0μmol/ml） 3. ALT底物液（含α-酮戊二酸2μmol/ml及DL-丙氨酸200μmol/ml） 4. 2.4二硝基苯肼溶液 5. 0.4mol/L NaOH溶液 (样本 ) 血清 实验原理 血清中的谷-丙转氨酶（ALT），在37℃、pH7.4的条件下，可催化基质（底物）液中的丙氨酸与α-酮戊二酸生成谷氨酸和丙酮酸： 生成的丙酮酸可与起终止和显色作用的2,4二硝基苯肼发生加成反应，生成丙酮酸-2,4-二硝基苯腙，进而在碱性环境中生成红棕色的苯腙硝醌化合物，其颜色的深浅在一定范围内与丙酮酸的生成量，亦即与ALT活性的高低成正比关系 实验操作 1.取空腹静脉血2ml，经离心分离得到血清，保存于冰箱中待用，因为血细胞中转氨酶活性较血清中高，故应防止溶血。若血清中此 酶活性过高，则可适当稀释后再用。 2.取干净试管12支，按下表所示标号，要求各S管和U管进行双管平行操作。先做对照管和测定管，在30min保温期间再做空白管和标准管。 实验结果 1.赖氏法测定ALT的标准曲线(即计量反应曲线) 在坐标纸上以上表中An－A 0之值为纵坐标，相应的酶活性的卡门氏单位为横坐标作图，即得赖氏法测定ALT的标准曲线 2.标本中ALT活性结果 ⑴查标准曲线 利用测定所得的吸光度结果(AU－AB)，便可从标准曲线上查得标本的ALT结果 ⑵计算 将实验测得的AU－AB 、AS 代入下面计算公式，即可算得标本中ALT活性 参考值. 5～25卡门氏单位 卡门氏单位的定义是：在温度25℃，pH7.4，波长340nm，光径1cm的条件下，1ml血清使NADH的吸光度下降0.001 的转氨酶活性。可见卡门氏单位不是用物质的量浓度，而是用物质的吸光度表示酶的活性单位的。若将卡门氏单位的定义条件代入国际单 位计算公式，即得卡门氏单位与国际单位的换算关系：1卡门氏单位=0.4821 IU/L(25℃)，便可将卡门氏单位兑换成国际单位 评价：改原赖氏法的反应温度(40℃改为37℃)和底物浓度(改为低浓度) 的改良赖氏法，对