wl新课基因工程的基本操作程序资料.pptVIP

PCR究竟是复制了目的基因还是获取了目的基因？ 2、将目的基因导入动物细胞 ①方法：显微注射法 ②程序： 归纳: 基因工程的基本操作程序 获取目的基因 从基因文库 利用PCR 化学方法人工合成 构建基因表达载体 目的基因、启动子、终止子、标记基因、复制原点 将目的基因导入受体细胞 农杆菌转化法、显微注射法等 目的基因的检测与鉴定 检测：是否插入、转录、翻译、个体水平 (⊙o⊙)？ (＠_＠;)  (+﹏+)~ (#‵′)( ^_^ )/~~ Y(^o^)Y (*^__^*) ↖(^ω^)↗ ?(^?^*) ~(@^_^@)~ ?(? ? ??)  ③过程： ④优点：经济有效， 适于双子叶、裸子植物 P12 （2）基因枪法 （3）花粉管通道法 目的基因表达载体提纯 取卵（受精卵） 显微注射 受精卵 新性状动物 3、将目的基因导入微生物细胞 ①原核生物特点：繁殖快、单细胞、遗传物质少 ②方法： 用Ca2+处理细胞 感受态细胞 表达载体与感受态细胞混合 感受态细胞吸收DNA分子 步骤四、目的基因的检测与鉴定 检查是否成功—— 导入插进染色体DNA 正常转录 正常翻译 真的有用 （一）、检测 1、检测转基因生物染色体的DNA上是否插入了目的基因 ①.首先取出转基因生物的基因组DNA ②. 放射性标记的目的基因单链, 做探针 ③.使探针和转基因生物的基因组杂交,若显示出杂交带,表明目的基因已插入染色体DNA中 （1）方法: DNA-DNA分子杂交 （2）过程: 4、个体水平检测 2、检测目的基因是否转录出了mRNA 3、检测目的基因是否翻译成蛋白质 抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等 ①方法: 方法: 抗原抗体杂交 ②过程: 用上述探针和转基因生物的mRNA杂交,若出现杂交带,表明目的基因转录出了mRNA DNA-RNA分子杂交 (四)目的基因的检测与鉴定 检测— ①检测转基因生物染色体的DNA 上是否插入了目的基因 ②检测目的基因是否转录出了mRNA ③检测目的基因是否翻译成蛋白质 方法—— 方法—— 方法—— DNA-DNA分子杂交 DNA-RNA分子杂交 抗原抗体特异性结合 ④个体水平检测 * 1.2 基因工程的基本操作程序 1、目的基因的获取 2、基因表达载体的构建 3、导入受体细胞 4、检测与鉴定 基因工程基本操作的四个步骤 步骤一：目的基因的获取 目的基因的提取方法: 从基因文库中获取 部分基因文库（cDNA文库） DNA合成仪 基因组文库 例如：抗虫基因等 PCR 基因文库： 将含有基因的DNA片段导入受体菌中储存，各个受体菌分别含有某生物的不同基因，称基因文库。 如果其中含有某生物所有的基因，则称基因组文库。 限制酶切割 基因与运载体结合 导入受体菌保存 \(^o^)/这就是基因文库！ 提取某种生物的全部DNA 用限制酶切 含所有基因的DNA片段 与运载体结合 导入受体菌中储存 基因组文库 全的叫基因组文库。不全的叫部分基因文库。比如cDNA文库，很好用哦?(? ? ??) 。 mRNA cDNA 反转录酶 cDNA文库 将某细胞中的mRNA经体外反转录，形成互补双链DNA片段，组成cDNA文库。 这样弄的基因不全吗？（来自特定发育时期的特定细胞） 这样弄的基因不完整吗 ( ⊙o⊙ )? 编码区 非编码区 非编码区 内含子 外显子 只有编码区被转录，形成mRNA前体，然后内含子对应区段被切除，形成mRNA，参与翻译。 (+﹏+)~用mRNA反转录的基因结构不全啊。 真核细胞的基因结构 启动子 终止子 在转录的时候，真核基因和原核基因都是转录基因的＿ ＿ ＿ ＿ ＿ 。原核基因这就OK了，但真核细胞还多一个工序，把＿ ＿ ＿ ＿对应的切掉，留下＿ ＿ ＿ ＿对应的区段。 让阿大来表达人胰岛素基因， (＠_＠;)阿大行不行啊？我们应对基因作什么处理？ 编码区 非编码区 非编码区 启动子 终止子 原核细胞的基因结构 基因组文库和 cDNA文库比较 P10 基因组文库和cDNA文库哪个比较好用呢？ cDNA文库比较小，基因不全，好不好？ cDNA文库基因结构不全哦——不含启动子、不含内含子，好不好？ ★分子生物学研究中最强大的实验技术之一 ★其本质是在体外模拟胞内DNA分子复制的过程 PCR 美国穆利斯发明了PCR技术,1993年诺贝尔奖 体内DNA怎么复制的，还记得不 (*^__^*) 1.概念 由一个DNA形成