小白菊内酯对胃细胞增殖抑制和诱导凋亡作用的研究.pdf

·中文论著摘要· 小白菊内酯对胃癌细胞增殖抑制和诱导 凋亡作用的研究 目 的 对于来自肝脏，乳腺，前列腺，血液等的多种肿瘤细胞，在其发生发展过程中发 挥良好的抑制效应，可以显著抑制多种人类肿瘤细胞生长，诱导肿瘤细胞凋亡。 小白菊内酯的抗肿瘤机制与其作为NF．r,B通路抑制剂息息相关，通过对NF．r．B的 影响线粒体功能，显示了其在肿瘤治疗中的应用价值，但目前，国际上对Par在 胃癌的研究方面还远不深入，为了探讨Par在胃癌治疗中的应用价值，我们研究 胃癌细胞体外迁移和侵袭能力的影响，通过检测Par在处理细胞后线粒体膜电位 瘤作用的机制。 方 法 1、MTT法检测不同浓度Par对肿瘤细胞的抑制作用 浓度的Par，对照组则加等量不含药物的培养液。Par处理24、48、72小时后， MTT法检测各孔吸光度(OD)值，计算细胞生长抑制率。 2、流式细胞仪分析细胞周期 消化收集各浓度Par处理24h的细胞，PI复合染液染色后，流式细胞仪检测， 分析细胞周期。 3、流式细胞仪检测细胞凋亡 分析细胞凋亡百分比。 4、流式细胞仪检测Par对细胞AWm的影响 消化收集各浓度P盯处理24h的细胞，罗丹明123染色后，流式细胞仪检测， 分析线粒体膜电位降低细胞所占百分比。 5、transwell小室检测Par对细胞体外迁移的影响 细胞数。 胶，作用48h后计数穿膜细胞数。 7、光镜下细胞形态观察 细胞接种于6孔板，以不同浓度Par处理细胞24h后，后倒置显微镜下用100 ×摄片，观察各组细胞形态。 8、荧光显微镜下观察细胞凋亡 收集以不同浓度Par处理24h的细胞，吖啶橙溶液染色，在荧光显微镜下用 400 X摄片，观察凋亡细胞形态。 9、western blot方法检测Bcl．2蛋白的表达 blot方法检测Bcl．2 收集7．51maol／L作用24，48，72h后的细胞蛋白，用western 蛋白的表达。 1 mRNA的表达 0、RT-PCR方法检测Caspase．8 基因的表达。 1l、统计学处理 2 本实验所有数据用均数4-标准差表示，利用SPSSl1．5分析软件，采用单因素 方差分析法进行差异性分析，P0．05被认为有显著差异。 结 果 1、Par对胃癌细胞生长的抑制作用 浓度的增加，对细胞的抑制率也逐渐增加。同一浓度的Par对胃癌细胞的抑制作 用随着时间的延长也逐渐增强。 2、Par对胃癌细胞周期分布的影响 统计学意义。 3、Par对胃癌细胞凋亡的影响 对照组SGC7901细胞早期凋亡率和晚期凋亡及坏死率分别为3．030／硅0．75％和 3 凋亡，包括早期和晚期凋亡。 4、Par对胃癌细胞△甲m的影响 流式细胞仪结果表明SGC7901细胞正常对照组△甲m降低的比例为 电位去极化，提示Par可能通过降低线粒体膜电位引起细胞凋亡。 5、Par对胃癌细胞体外迁移的影响 25．67+4．040o．01)，9．674-2．08 数为1 抑制胃癌细胞体外迁移活性。 6、Par对胃癌细胞体外侵袭的影响 4 334-6 Q0．01)，12．674-3．21 分别为69．334-3．06，47．334-5．51 Oo．05)，234-6．560o．01)，结果表明Par以浓度 依赖方式抑制胃癌细胞体外侵袭活性。 7、光镜下细胞形态观察 对照组胃癌细胞其贴壁生长良好，细胞轮廓清晰，细胞间结构紧密，细胞生 数量减少，细胞形态变圆，体积缩小，核出现