作用于β淀粉样白的药物筛选与分析及其相关机理初探.pdf

作用于B淀粉样蛋白的药物筛选与分析 及其相关机理初探 专 业：神经病学 硕士生：丘东海 指导教师：李中副教授 摘 要 随着老年人口比重的不断上升，老年人的精神卫生问题日渐突出，尤其是 危害最严重的老年性痴呆病人越来越多。痴呆严重影响老年人的生活质量，并 且给国家、社会和家庭带来沉重的负担。研究老年性痴呆的发病机制、寻找有 效的治疗方法已经成为当前医学科学关注的焦点之一。在老年性痴呆的治疗研 究中，筛选以天然植物药为主体的天然药物，研制出先导化合物来开发创新药 物，具有极大的市场开发潜力。 [目的] 以阿尔茨海默病发病的关键分子B淀粉样蛋白为靶，从一系列候选的天然 产物中筛选出能够影响B淀粉样蛋白产生和聚集的有效药物，继而分离、提纯 和鉴定有效药物中的单体活性成分，为化合物结构的进一步改造及其生物学活 性的改善奠定基础。最后比较不同化合物抑制B淀粉样蛋白产生和聚集的效果， 并初步探讨其中可能存在的药理作用机制。 [方法] 1、建立B淀粉样蛋白体外老化模型，采用硫磺素T荧光分析，通过体外孵 育方式观察候选药物干预0淀粉样蛋白聚集和纤维形成作用；继而通过圆二色 光谱仪检测B淀粉样蛋白二级结构的变化情况。2、利用转染APP瑞典型突变 毒性，并运用蛋白印迹法检测药物干预后B淀粉样蛋白含量变化。3、采用柱层 析法、重结晶法由姜黄中分离纯化出三种化合物，分别采用薄层层析法和高效 IlI 液相色谱仪对分离产物进行纯度鉴定，使用质谱法测定各自的分子量。4、利用 HEK细胞模型，比较三种化合物抑制B淀粉样蛋白产生的能力。5、所有数据 用SPSS16．O统计分析。 [结果] 1、随着B淀粉样蛋白孵育时间的延长，荧光强度逐渐增加，尤其是48h荧 光强度明显升高。 2、细辛脑以及丹皮酚能够抑制B淀粉样蛋白聚集，但对已聚集的纤维无影 响作用。姜黄能够抑制B淀粉样蛋白聚集，存在剂量依赖效应，同时对己聚集 的纤维有一定影响作用。 3、姜黄抑制B淀粉样蛋白聚集主要通过其二级结构的改变，由B折叠为主 转变成a螺旋为主。 4、姜黄能够剂量依赖地抑制B淀粉样蛋白生成。 5、从姜黄分离纯化出三种有效单体成分，分别为姜黄素、脱甲氧基姜黄素 和双脱甲氧基姜黄素。 6、三种姜黄素类化合物都能剂量依赖地抑制B淀粉样蛋白生成，其中以姜 黄素的抑制能力最为明显。 [结论] 本课题组成功构建的B淀粉样蛋白体外老化模型和转染APP瑞典型突变基 于初筛作用于B淀粉样蛋白途径的药物和进一步的药理机制探讨。 姜黄能够抑制B淀粉样蛋白的聚集和生成，且从天然药物姜黄中可分离纯 化出三种姜黄素类化合物，能减少B淀粉样蛋白的生成和聚集，其作用强度为 姜黄素脱甲氧基姜黄素双脱甲氧基姜黄素，药理作用的差异可能与姜黄素 类化合物苯环3位上的甲氧基相关，其机制可能与抑制分泌酶作用有关。 关键词：阿尔茨海默病；淀粉样蛋白；淀粉样前体蛋白；姜黄；姜黄素 IV Drug and to Betaand ScreeningAnalysis1’argetedAmyloid of ItsCorrelatiVeMechanism Exploration Major：Neurolo斟 Master candidate：QiuDonghai Prof．Li SuperVisor：ViceZhong ABSTRACT With