第5章 糖与苷精要.ppt

1、纯度的测定 纯度 不同于小分子化合物 相似链长的平均分布 方法 超离心法 HPCE 凝胶色谱法, 柱h:d40 旋光测定法：不同浓度乙醇↓，比较 官能团摩尔比法、RI、HPLC法等 2、MW 传统方法 物理方法：沉降法、光散射法、粘度法、渗透压法、超滤过法、超离心法 凝胶柱色谱法 MS ESI-MS：单或多电荷质子 MALDI-TOF-MS MALDI (基质辅助激光解析电离)：激光照射样品与基质形成的共结晶薄膜，基质从激光中吸收能量传递给生物分子，而电离过程中将质子转移到生物分子或从生物分子得到质子，而使生物分子电离的过程 多为单电荷质子! 3、单糖的组成 全水解 PC 显色确定：单糖的种类 TLCS：大致定量 GLC 多糖：MeOH解→TMS化 以甘露醇或肌醇为内标，用已知单糖作标准 HPLC 5、单糖之间连接位置的决定 多糖：全甲基化→水解→GC定性和定量 水解 先用90%HCOOH水解，再用0.05M H2SO4或CF3COOH水解 MeOH解：有时会造成糖连接位点的甲基化，少用! 甲基化单糖中游离-OH的部位就是连接位置 低聚糖 1H-NMR：全乙酰化→2D-NMR 13C-NMR测定：苷化位移 6、糖链连接顺序的决定 缓和水解法 将多糖链水解成较小的片段，然后分析这些低聚糖的连接顺序 13C-NMR：弛豫时间T1 外侧糖较大 同一个糖基本相同 质谱分析：FAB-MS 2D-NMR 重点回顾 重点回顾 掌握常见几种单糖的结构 (Haworth式) 掌握化学反应的特点及应用 掌握苷键裂解的各种方法及其特点 如：酸解、碱解、酶解、Smith降解等 1H-NMR及13C-NMR在糖苷中的应用 苷键构型的测定 化学位移值大致区间 糖端基碳的化学位移值 利用J值判断苷键构型 苷化位移（含酚苷和酯苷） 糖的构型构象 反应 Molish 反应 样品 + 浓H2SO4 + α-萘酚 → 棕色环 酸水解反应 反应难易 苷原子的电子云密度↑ 质子化位阻↓ 环张力↑ (稳定性↓) 反应方式 酸水水解法 两相水解法 温和酸水解 盐酸甲醇水解 端基质子的J值与构型 J值确定糖端基的构型 2-H处于a键的糖 6~8 Hz: H1处于a键 2~4 Hz: H1处于e键 2-H处于e键的糖 !!! 鼠李糖优势构象：1C式 × 苷化位移 (glycosidation shift) 定义 糖苷化后 端基碳 多向低场移动 酯苷：稍向高场! 醇苷元 α-C：向低场移动 β-C：多向高场移动 酚、酯苷元 α-C：向高场移动 β-C：稍向低场移动 其余碳的影响不大 这种苷化前后的化学变化，称苷化位移 二、13C-NMR 化学位移 -CH3：~18 CH2OH：~62 CHOH：68~85 呋喃糖C3、C5：多80 端基C：95~105 100：多数的β-D、α-L苷 少数降为~98：酯苷、酚苷 (注意1H-NMR的数值)、叔醇苷 100：多数的α-D、β-L苷 *特殊：D-arabinose 1JC1-H1与苷键构型 吡喃糖 C1式 164 (160~165) Hz: β-D、α-L 165 (170~175) Hz: α-D、β-L 1C式：鼠李糖，相反! α-L： 160~170 Hz β-L： 150~160 Hz 呋喃糖：无法判断 苷化位移 (glycosidation shift) 定义 糖苷化后 端基碳 多向低场移动 酯苷：稍向高场! 醇苷元 α-C：向低场移动 β-C：多向高场移动 酚、酯苷元 α-C：向高场移动 β-C：稍向低场移动 其余碳的影响不大 这种苷化前后的化学变化，称苷化位移 苷元β位有取代时的苷化位移 苷元α-碳和糖端基手性相同(同为R或S)时：与苷元为β-无取代的环醇相同 苷元α-碳和糖端基碳手性不同时：苷化位移值增大~3.5 例：齐墩果酸 13C-NMR的取代基位移 -OH的甲基化位移 无论醇、酚-OH，甲基化后，α-C低场位移，β-C高场位移 13C-NMR的取代基位移 -OH的酰化位移 醇-OH： α-C低场位移，β-C高场位移 酚-OH： α-C高场位移，β-C低场位移 第7节 糖和苷的提取分离 一、提取 杀酶保苷 采集新鲜材料 迅速加热干燥；冷冻保存 溶剂法：水；稀醇 (单糖、低聚糖、多糖) 糖类: 冷热水、冷热稀醇 苷类: 根据极性大小，选择相适应的溶剂 蛋白质除去法 粗多糖，常夹杂有较多的蛋白质 方法 Sevag法 CHCl3+戊醇(丁醇)+多糖水溶液 5：1：25→剧烈振摇20 min→离心，除去两相间的变性蛋白 温和，但要重复5次 三氟三氯乙烷法 多糖水溶液+CF3-CCl3 1:1→搅拌10 min→离心取水层，2次 温和 三氯醋酸法 多糖水溶液，滴加3%