基因在人胃癌组和细胞株中的表达及其意义硕士学位论文.docVIP

摘要: 目的：本实验采用实时荧光定量PCR、Western Blot法以及免疫组化SP法分别检测fascin1在胃癌细胞及胃癌组织中的表达，进一步分析fascin1的表达水平和胃癌患者临床病理参数的相关性，旨在探讨其与胃癌发生、发展及预后的关系，为胃癌的基因治疗提供参考数据。 方法：本实验由两部分组成：①将正常胃粘膜上皮细胞株GES-1，不同分化胃癌细胞株MKN28、SGC-7901、MKN45RT-qPCR检测fascin1 mRNA的表达水平;Western lot法检测以上四种细胞中fascin1蛋白表达水平。②采用免疫组化SP法检测fascin1在80例胃癌组织标本中的表达水平，同时取距离肿瘤组织5cm的癌旁正常胃膜20例作为正常对照，并结合患者的统计分析与fascin1之间可能的关系。 结果：（1）实验中提取的RNA和蛋白质经过质量测定，均符合实验要求（2）PCR和Western blot分析法结果显示：正常胃粘膜细胞及不同分化胃癌细胞株均有fascin1mRNA和fascin1蛋白的表达；三组胃癌细胞的fascin1mRNA和fascin1蛋白的相对表达量较正常胃粘膜细胞分别具有差异性，且差异具有统计学意义（P0.05）；而在胃癌细胞中fascin1 mRNA和fascin1蛋白的表达水平，随着细胞分化程度的降低，逐渐的上调。(3)免疫组化fascin1阳性表达主要位于胃癌细胞浆和胞膜，胃癌间质中的血管内皮细胞亦可见 fascin-1阳性染色在癌旁组织中,可见血管内皮细胞及淋巴组织的树突状细胞中均呈阳性表达。fascin1在80例胃癌中的48例呈不同程度的阳性表达，占58.75%，其中22例为（+++++），占27.5%，其中在20例癌旁5cm以上正常胃粘膜中有3例fascin-1弱阳性（+），而此20例标本相应的胃癌组织中fascin1有表达。fascin1在胃癌组织和癌旁正常胃粘膜标本中的表达水平二者差异具有显著性（P＜0.05）。进一步分析胃癌中fascin1的表达及其与临床病理相关指标的关系发现，fascin1在未低分化组的表达高于高中分化组，在肿瘤的直径5cm标本中fascin1的表达高于≤5cm者（P＜0.05），在胃癌伴远处转移的病例fascin1的表达相对较高，且fascin1的表达水平与胃癌的TNM分期相关，胃癌患者的TNM分期越晚，fascin1表达越高（P＜0.05），fascin1的表达仅与胃癌组织的分化程度、肿瘤直径淋巴结转移TNM分期有关，与肿瘤位置、年龄、性别没有显著相关性。 结论： 符号说明 英文缩写 英文全称 中文名称 cDNA complementary DNA 互补脱氧核糖核酸 mRNA messenger RNA 信使RNA miRNA microRNA 微小RNA fascin actin-bundling protein 1 肌 DNA deoxyribonucleic acid 脱氧核糖核酸 RNA ribonucleic acid 核糖核酸 RT-qPCR Real-time Quantitative PCR 实时定量PCR RT reverse transeription 逆转录 SPSS Statistical Package for Social Statistics 社会科学统计软件包 EP Eppendorf tube Eppendorf 离心管 RT reverse transeription 逆转录 PCR Polymerase chain reaction 聚合酶链式反应 DEPC diethyl pyrocarbonate 二乙基焦磷酸盐 SDS sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electropheresis 聚丙酰胺凝胶电泳 SDS sodium dodecylsulphate 十二烷基磺酸钠 DAB diaminobenzidine 二氨基联苯胺DMSO dimethyl sulfoxide 二甲亚砜 PBS phosphate buffer 磷酸盐缓冲液 DTT dithiothreitol 二硫苏糖醇 HRP horse radish peroxidase 辣根过氧化物酶 EMSA electrophoretic mobility shift assay 凝胶迁移率分析 第一章 前 言 胃癌(gastric c