生物化学与分子生物学进展..pptVIP

生化与分子进展万嗣宝wansibao@126.com “生科院”月饼 中国农业大学“学院派”干红 明末哲学家李贽——“蟹仙” 联系方式 电 话手 机E-mail ：wansibao@126.com QQ 办公室：生命学院908室 简 历 上海市的特色农产品 代表性研究论文 承担的科研项目 植物磷脂酶D研究进展 磷脂酶D氨基酸序列的结构特点 磷脂酶D的生理功能 催化膜脂降解，参与细胞膜重建，等等 参与植物的衰老进程 参与植物的非生物胁迫和生物胁迫反应 参与植物激素介导的信号转导 机械损伤 干旱 渗透胁迫 低温 冷害发生之前冷敏感型玉米体内的PLDα 活性较耐冷型玉米高2 倍左右，当冷害发生的时候，二者体内的PLDα 活性均有较大幅度的升高(Pinhero et al., 2000)。 在拟南芥上的研究表明，PLDα 基因缺失株的抗霜冻能力比野生型明显高，但是，PLDδ 基因被敲除后，拟南芥抗冻性下降，PLDδ 基因超表达拟南芥的抗冻性则提高，而且比PLDα 反义抑制后提高的效果更显著(Cui et al., 2000)。 病原菌侵染 水稻受白叶枯病侵染时，PLDα活性明显提高，且抗病性品种尤为明显，荧光抗体标记的结果显示，随着病原体的侵入，抗性植株PLDα逐渐聚集于质膜上病原体的侵入位点，这暗示着PLDα参与植物对病菌的抵御过程，并且PLDα的表达量与质膜上分布变化的差异可能是植株抗病性不同的原因（Young 等, 1996）。 用真菌激发子——木聚糖酶处理烟草细胞时，很快可以看到与真菌侵染植物时最初的激发过程有直接关系的NAE（N-乙酰乙醇胺）的释放，NAE是PLDβ和 PLDγ水解NAPE（N-乙酰基磷脂酰乙醇胺）的结果，从而证明PLDβ和 PLDγ在抗病育种中的潜在价值（Munnik等, 1995）。 Cui等（2000）在转反义PLDγ基因的烟草中选育出对TMV（烟草花叶病毒）和PVY（马铃薯Y病毒）几乎免疫的多个植株。 Yamaguchi等（2009）研究表明OsPLDβ1是水稻防御反应和抗病性的负调节因子，抑制OsPLDβ1表达的水稻植株在没有病原菌侵染的情况下自发激活了防御反应，提高了对水稻主要病原菌如稻瘟病菌和水稻黄单胞菌的抗性。 信号途径 葡萄磷脂酶Da基因的克隆 总RNA的提取 简并引物的设计 引物设计的原则 （1)序列应位于高度保守区,与非扩增区无同源序列。 （2）引物长度以18-30 bp为宜。 （3）碱基尽可能随机分布，G+C占50-60%。 （4）引物内部避免形成二级结构。发卡结构 （5）两引物间避免有互补序列。二聚体 （6）引物3’端为关键碱基；5’端无严格限制。 RACE-PCR RACE（rapid-amplification of cDNA ends）是20世纪80年代发展起来的通过PCR进行cDNA末端快速克隆的技术。 RACE是基于PCR技术由已知的一段cDNA片段，通过往两端延伸扩增而获得完整3’端和5’端的方法。 3’-RACE 5’-RACE 全长cDNA的获得 通过测序鉴定了RACE产物之后，可以通过两种选择获得全长的cDNA。 （1）通过PCR的方法。 （2）通过克隆的方法。 葡萄磷脂酶Da氨基酸序列分析 结构域分析 系统进化分析 跨膜区分析 VvPLDa对热激处理的响应 葡萄磷脂酶Da参与低温诱导耐热性的研究 1、Low temperature acclimation induced the development  of grape berry thermotolerance 温度处理对HSP的影响 2、Low temperature acclimation triggered the accumulation of SA and the activation of PLD leading to the development of thermotolerance 3、1-Butanol inhibited low temperature acclimation-induced accumulation of free SA and expression of HSP73 结论与讨论 The present work indicated that low temperature acclimation increased thermotolerance of grape berry. It clearly demonstrated that the activation of PLD was an early