番茄种质资源遗多样性RAPD分析及抗病基因同源类似物RGA分析.pdf

摘 要 本实验利用RAPD技术对广泛栽培的番茄出种车{l职川农业人学保存的番茄釉质资源 (共20个品种材料)进行遗传多样分丰JI，特别对四川农!世大学保存的种质资源的遗传亲 源关系和遗传多样性进行分析，结果表明： RAPD反应体系和扩增程序比较合理。 进行扩增，5个引物共扩增出30条，其一中多态性能点23个，占总位点的76．7％，平均 每个引物扩增出4．6条具有多态性谱带。 BisVance法讨算 利用计算桃软件NTSYSpc(2，10版)统计RAPD数据，崩Genetic 年4荆问遗传距离。19号(美国番茄)与l(】号(早红宝)的遗传距离最小为0，说明两 3号【W262．4)的遗传距离最大， 肖的遗传基础基本一致。而4号(荚味樱桃番茄)与J 为0．805，按照uP矾A法进行聚类分析，将番茄分成瑙类，番茄羼的20份材料分戍了四 国903)、11号(宝大903)、l 杂9号)。同酬，将四大类番茄类内和类问平均柿似系数进行了分析．类内以第lji类最 45)。 以第1类与第1l类间的最高(O．7456)，第1II类与第1V类问最低(0 DNA片段，以其作为三个候选抗性基因的探tt，为咀后从cDRA文库中筛选出抗病基因作 下基础。 关键词：番茄RAPD遗传距离聚类分析抗病基因同源序列 1前言 叶困际上农业的重大发展，无不与：捉作物的种质孜良有关；农业综合圈力高低的体现， 直接与农业种质资源的丰富和利用程度有关：国际市场上农产品的竞争，也无不与农作 物的种质优劣有关，甚至国际农产品贸易的斗争中，也在涉及种质的问题上做起了文章。 农业利，质资源多样性的实质，是农作物的遗传多样性，是农业生物多样性的源泉，农业 的可持续发展的能力和农业综合国力的强弱，都取决于农业生物多样性的程度，或者说 卣接决定于农业种质资源多样性的收减保存和利羽柏樱度。没有丰离的种质资源，就无 法育成优良品种，既不能进一步提高自己的生产水iF，持续发展农业，又无力在国际市 场上参与竞争，综合国力也受到影响。因此农业种质多样性的收藏、保存和利用，建立 仙界性重要作物的种质资源库，不仅是为了当前的农业发展，为了参与竞争，也是为了 21。 长远的农、Ik可持续发展和综合国力的提高m 番茄是世界上重要的农作物之 ， 番茄在世界农业经济和农业市场中的重要地 位：番茄还是生物学研究中的模式植物之一，在科学研究巾所处的重要地位。因此对番 航种质资源的研究不仅有其重要的经济意义，而且在科学研究中还有不可忽视的价值。 2文献综述 2 1分子标记种类 研究生物变异的标记来源大体可分四类即：表型多态性，染色体多态性，蛋白质多 念性和DNA多态性。表型的多态性是遗传与环境相互作用的综合结果，并不能完全或真 实的反映遗传变异。因此，表型变异如果没有经过遗传分析的确证，严格的讲不能称为 遗传变异或者不能作为列变异后代选择与评价的遗传标}己。而染色体形态，数目与大小 的不同对同一物种或类群来说，其遗传变异的分辩力就已丧失。研究蛋白质多态性的重 要手段是同工酶电泳技术，同工酶是基因表达的产物。它是间接反映了物种的遗传信息， 经过遗传分析确定等位基因编码的同工酶称为等位酶，绝大多数同工酶位点是共显性 的。DNA分子标记技术的建立与发展是近十年分子生物学技术发展的产物。F面对应用 较多的分子标记技术进行简要叙述之。 2．11 RFLP技术 RFLP是指限制酶位点削的插入、缺失、熏排或点突破导致酶切位点的增减所引起的 基因型矧限制性片段的差异。RFLP标i已是DNA分子水平变异的反映。不受显隐性关 系发育阶段的和环境条件的影响，具有稳定遗传和特异性的特点。但RFLP标记是一项 综合技术，涉及一系列分子生物学技术，技术复杂，所需费用昂贵，而且RFLP分析的 效率依赖于合适探针及内切酶的获得，只有选用合适探针和内切酶，某个位点才能表现 出多态性，同时由于使用同位素，更使它的r泛应用受到限制，目前主要局限于理论研 究的领域∞1。 2。1．2 AFLP技术