分蘖洋葱病毒病鉴定及脱毒苗培养#183;增殖技术的研究.pdf

徐启江 摘要 2001年5月 摘 要 龙江省分孽洋葱病毒病发生普遍，阿城、宾县、五常三个地区的发病率均为100%, 数分别为62.13%.71.07%和49.87%.典刑症状为黄化条纹花叫，叶片扭曲崎形、 叶尖干枯，植株矮缩.鳞从退化变小，产量和品质大幅度 卜降。 人}_接种发现，可被分孽洋葱病毒系统感染的植物有洋葱、人葱、大蒜和蚕豆:局 部感染的有千日红、芡色葬。电镜观察表明，病体细胞中含有人最线状病毒粒体，其长 ， 度范围在300-1450nm之间。通过叶片超薄切片，在叶肉细胞质中观察到人最的风轮状、 束状、涡轮状和环状内含体，叶绿体被破坏。体外抗性测定结果:致死温度为55-650C, 尹 稀释限点为10-4，体外保毒期为3d.酶联免疫测试和洋葱黄矮病毒抗血清、人蒜复合病 毒抗血清11,.阳性反应。根据以上特征证明，黑龙江省分孽洋葱病毒病为儿种病毒复合佼 染，具体包括哪儿种有待于进一步研究。厂 以阿城紫皮分孽洋葱鳞苹0.15-0.3mm效尖为外植体，以ms为基本培养基，添加蔗 糖3.0%,琼脂0.8%,pH值调至5.7-5.80通过激素配比试验，筛选出最佳的培养基组成。 利用植物组织培养技术，获得了分桑洋葱无毒试管苗，结果表明:最佳诱芽培养基为 MS+BAO.Img/I+NAAO.4mg/L,诱导率为100%，平均每个茎尖外植体形成3.1个不定芽， 而且无愈伤组织的形成:最佳生根培养基为1/2MS+IBA1.5mg/I+NAAO.01mg/I+PP3330.1 mg/I，利用此项组培技术，进行了不同外植体大小、鳞茎热处理对脱毒效果影响的研究， 结果表明，80C高温处理 1Omin，然后剥取0.3-0.5mm的茎尖进行培养.脱毒率为100%o 以阿城紫皮分桑洋葱鳞草钱尖为外植体材料，对分桑洋葱愈伤组织的诱导、分化、 币庄xt8h片坦in分-Hl4-4t1}了孤} kl田t:na_in左下曰,%141相人t!,镜兰甘 卜。彼:,3xrhr, 茎尖均能产生愈伤组织，其中2,4-D2.Omg/I+KTO.5mg/L的MS培养基对愈伤组织的诱导 最有利，其出愈率为100%; (2)在愈伤组织的分化中，转接到添加NAA,BA的MS分 化培养基上，愈伤组织进一步膨大，出现绿色芽点，均形成大量的丛生芽，其中以NAA0.1 mg/I+BA0.4mg/I的MS分化培养基最佳，其分化率为88.33%。平均成苗数为10.2，技 术上达到了快速繁殖、规模生产的要求;i3)再生植株生根和壮苗的最佳激素组合为 I/2MS+pp3330.lmg/I+NAA0.01mg/I+IBA1.5mg/I。生根率为100%,根系发达，叶色浓绿， 生长健壮。移栽后长势良好，对环境具有较强的适应性，移栽成活率达100%, 分孽洋葱试管微鳞茎的诱导研究表明:离体条件 卜，a度和光周期对试管鳞苹的形 成起着决定性的作用，而且提高培养基的pH值、增加蔗糖浓度也有重要的调控作用。 细胞学观察表明:At尖分生组织培养脱毒苗遗传稳定，染色体未发生变异，均为 2n=16;愈伤组织及其再生苗遗传稳定性差，愈伤组织染色体变异率为33.85%,其中单 倍体占9.23%，四倍体占15.39%,非整倍体.ti9.23%:愈伤组织再生苗 异率为 24.62%，其中四倍体.Ii16.93%,非核倍体ii7.69%。未发现三倍体的存在 通过以上研究，对分葵洋葱建立了有效的钱尖培养脱毒苗的速繁体系。 关键词 分桑洋葱病毒病 病毒病原鉴定 脱毒 华尖分生组织培养 少， 徐启江