乳酸片球菌素发条件的优化及分离纯化的研究.pdf

中文摘要 细菌素是微-牛物的代谢产物，有的细菌素已作为食品防腐剂用于提高食品的 安全性。本研究的目的是以从国内发酵食品中分离出的乳酸片球菌PA003 (Pediococcusacidilactici PA003)为研究对象，探索提高其片球菌素产率的 培养条件，研究片球菌素的分离纯化技术。 乳酸片球菌产生的片球菌素对产生菌有吸附作用，Yang等利用该吸附特性 建立了分离纯化片球菌素的方法。本试验对乳酸片球菌PA003产生的片球菌素的 吸附作用进行了研究，表明片球菌素对产生菌的吸附具有pH依赖性，在pH为6 刚，片球菌素对产生菌茼体的吸附程度最大，达60％，在pH3以下和pHlO以上， 对菌体的吸附程度为零：根据上述现象．建市了在pH6吸附，pHl0解吸附的方 法，蛋白浓度提高了2．53倍，比活为2．33×10。AU／mg。 在摇瓶培养条件下，对培养基组分，包括碳源、氮源、表面活性剂等对乳酸 片球菌素产量的影响进行了研究。发现最适的培养基组成为葡萄糖2．5％、大百 蛋白胨1．5％、蛋白胨1．5％、牛肉膏2％，吐温801％，磷酸氢二钾0．2％，乙酸钠 0．5％，柠檬酸铵0．2％，硫酸镁0．058％，硫酸锰0．025％。采用此培养基，在37。C 基培养效价提高了约9倍。 用常规MRS培养基，接种乳酸片球菌，37℃条件下培养16小时后，获取片 球菌素解吸附的菌体细胞，细胞经破碎处理后，测定其片球菌素效价大小，发现 胞内片球菌素效价可达到胞外片球菌素效价的30％。 将乳酸片球菌接种至MRS培养基，于5升发酵罐中进行培养。发酵条件为温 度37℃，转速200rpm，pH值6．0、6．5、7．0和8．0，发现最适产片球菌素pH 是6．5，最适于菌体生长的pH是7．0，而在pH8．0时片球菌已无生长。通过在菌 体生长稳定期流加限制性底物葡萄糖，发现流加低浓度的葡萄糖(39／h)更适于片 球菌素的产生。最高效价是l147．821AU／mL，是未流加葡萄糖情况下最高效价的 1．27倍。 ． 本研究建立了乳酸片球菌细菌素的分离纯化技术，确定了高产片球菌素培养 基，获得了5升发酵罐条件下片球菌素发酵的基本参数，为实现片球菌细菌素的 工业化生产提供理论依据。 关键词：细菌素分离纯化发酵 ABSTRACT Bacteriocinsweremetabolitedof someofwhich productsrmcroorganlsiils．and wereusedasfood tO thefood bacteriocin preservativeimpove safety．A producing strainPediococcusacidilacticiPA003wasisolatedfromfermented foodin vegetable the cultiveconditionswere previousstudy．The optimized，thepurification wasstudied． technologies fromPediococcusacidilacticicouldabsorbedonto bacteria． Pediocin producing of characterof toestablish Randothersmakedusethe pediocin Yang pH—adsorption the method．PediocinfromPediococcusacidila