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核酸类物质—单磷酸阿糖腺苷 第二实验小组：李志杨 许明 彭海 魏来 陈骏驰 基本资料 基本资料 单磷酸阿糖腺苷的制备 1材料 1．1仪器 CHN-O．RARID元素分析仪 德国Heraeus公司 ，UV3100紫外分光光度计 日本岛津司 NEXUS870红外光谱仪 美国Nicolet公司 ，DRX一500核磁共振仪 瑞士Broker公司 ，PYRIS，DSC，TGA，DTA热分析仪 美国Perkin．Elmer ，LCQ液质联用仪 美国Firmigan公司 。 1．2原料或试剂 B~D阿糖腺苷 原料药，广东清平制药有限公司 ；三氯氧磷 纯度≥99％，江苏常余化工有限公司，优级品 ；吡啶 AR ；乙腈 AR 。 31P．核磁共振谱磷谱在∮：6．772处有特征峰，磷谱信息与样品结构相符。 13C核磁共振谱分析 单磷酸阿糖腺苷的13C—NMR DEVI‘901350 样品碳谱的碳原子数和碳的类型，与其化学结构式相符。 差示热分析、热失重分析在差热分析中，升温过程有吸热峰，峰值为212．2 oC。样品还有一热失重过程，由失重量5．231 3％可推算出为l tool水分子，与分子式clo H14 N5 07 P·H2 0中理论值4．928％结晶水含量基本相符。 质谱分析单磷酸阿糖腺苷ESI—MS m／z 中，准分子离子峰[M一1]+ 不包含结晶水 为346．2，与其分子式中cloHl4N507P相符。 综合上述分析结果，样品的化学结构可以确证为单磷酸阿糖腺苷。 总结 结果单磷酸阿糖腺苷经紫外、核磁、质谱等证实。结论本法原料易得，操作简单，总收率高，是理想的工业化生产路线。 在低温条件下用三氯氧磷使阿糖腺苷磷酸酯化，水解后加入溶剂分离磷酸三乙酯，水相中加入三乙胺为脱酸剂，并控制反应温度于乙醇中结晶析出单磷酸阿糖腺苷，粗品收率90%，常规方法精制纯化后得成品。 仪器与试剂 LC-2010 高效液相色谱仪（日本岛津公司）； SF-1 型微量水分测定仪（淄博淄分仪器有限公 司）；X4 显微熔点测定仪 北京泰克仪器有限公 司 ，温度计未经校正。 单磷酸阿糖腺苷对照品由中国药品生物制品 检定所购入，阿糖腺苷由广东清平制药有限公司 购入，50℃下减压干燥至水分＜0.2%。其余原料 及试剂均为分析纯。 单磷酸阿糖腺苷的制备 于500ml 反应瓶中投入预先干燥的阿糖腺苷25.0g 0.094mol ，加入磷酸三乙酯250ml，搅拌，冰浴冷却至0℃。滴加三氯氧磷20.1g（0.132mol），一小时滴完，滴完继续搅拌一小时。倒入200g碎冰中水解，加入二氯甲烷300ml×2 提取，分出油层。水层中加入三乙胺调节PH＞2，并降温至18℃ 以下。将水相缓慢滴加至600ml 乙醇中，控温18℃以下搅拌5 小时，过滤析出的结晶。50℃减压干燥，得单磷酸阿糖腺苷粗品29.3g，收率90%。 单磷酸阿糖胞苷的制备 将单磷酸阿糖腺苷粗品25g 加入纯化水500ml，升温至70℃，溶清后脱色，将滤液加入至500ml 乙醇中，冷却至室温过滤，50℃减压干燥， 得单磷酸阿糖腺苷成品18.5g 。mp212-213℃ 分解 ，收率74%。液相色谱保留时间与单磷酸阿糖腺苷对照品一致，外标法测得含量为99.1%。 结果讨论 单磷酸阿糖腺苷的溶解实验表明其在水中溶解，在乙醇中难溶。在合成过程中，阿糖腺苷与三氯氧磷在低温下反应，过量的三氯氧磷水解会产生大量的氯化氢，用有机溶剂提取后，水相呈强酸性，如不控制PH，产品难以得到。 结果讨论 采用常规的缚酸剂三乙胺吸收生成的氯化氢，并控制较低的温度下将单磷酸阿糖腺苷水溶液加入至乙醇中，使得三乙胺盐酸盐溶解于乙醇中，而难溶于乙醇的单磷酸阿糖腺苷则结晶析出，精制后得到成品。 本方法具有反应条件温和，原料易得，后处理简单等优点，适宜于大规模生产。 谢谢！ * 单磷酸阿糖腺苷 vidarabinemonophosphate，Am—AMP 是阿糖腺苷 Ara-A 的单磷酸化合物，是一种人工合成的腺嘌呤核苷类抗病毒药。 主要用于治疗慢性乙型肝炎和其它病毒性感染如带状疱疹、单纯疱疹、生殖器疱疹等，起效快，疗效明确。是临床抗病毒治疗的常用药物。 方法一：阿糖腺苷磷酸化 *