微生物检验方法的控制技术.PPTVIP

微生物检验方法的控制技术 吉林出入境检验检疫局技术中心 罗雁非 摘要：为了更好地加强微生物检验工作中的质量控制和质量保证，我实验室选用两种不同的方法来控制沙门氏菌的检测，来保证检验方法的实效性、特异性、可靠性和准确性。对样品进行沙门氏菌的检测和样品中添加沙门氏菌标准菌株后的检测，来确认方法的等同性。结果表明，选定的两种不同方法对两种沙门氏菌标准菌株的检测完全一致，说明两种不同的方法的等效性。并阐述了检测方法的标准操作规范（SOP），来培养良好的实验室操作（GLP）和良好的测量操作（GMP）。 一、确定实验方法的目的和意义 随着我国入世步伐的加快，国际和地区间的交流日益广泛，如何提高检验检疫数据的准确性和可靠性以及实验室如何采取有效的质量保证措施，保证检验结果的准确性和可靠性，愈来愈呈现得重要。质量控制是保证实验室质量的手段之一，其定义：为保证实验室得到的数据的准确和精确在已知的概率限度内所采取的那些措施。保证报告和数据的质量，就是实验室质量保证的目的和目标。影响报告和数据质量的因素有：数据本身的质量、方法有关的质量、分析体系的质量。据资料报道，我国对微生物实验室进行了全面的质量控制已有20年的历史，多年来人们强调质量控制和质量评价，人们越来越清楚地认识到质量控制是真正提高检验质量，保证检验结果的准确性和可靠性。而检验是我们工作和调查的基础，检测质量控制也成为我们工作中需要重视的问题，甚至是我们检验工作者必须认真讨论的问题。 检测结果不仅需要依赖实验室的仪器、标准菌株以及操作人员的技术水平等诸多因素，要保证数据的准确和可靠要有一种标准方法来实施，这是我们工作的基础，今天要着重讨论的这个问题。 标准方法是权威机构对某项测试所作的同意规定的技术准则和各个方面共同遵守的技术依据。也是应以满足用户提出质量要求为最终目的并为保证结果的重复性、再现性和准确性。 微生物的种类很多，不同类的微生物的生理特性不同，用于检测和验证的微生物试验是具有挑战性和广泛性的，至少要包括G+菌、G+菌、酵母菌和霉菌类的微生物。这几类微生物基本包含了样品中可能存在的各类微生物，另一方面，他们也基本包含了样品中可能存在防腐剂抑菌效果检查试验中所要使用的实验菌株。 在选择试验方法，必须根据以下几个特点来选择： 1.准确性要好； 2.精确，很少离散； 3.特异性好，对样品中其他成分没有依赖或干扰； 4.实用性好，使用的范围广和适应性宽； 5.可靠性、耐受性、再现性好； 6.灵敏性好； 7.检查所受的限制少。 二、实验方法的验证 方法选定以后，就是要用现行的方法来验证方法的可行性，必须通过外界组织和实验室自身来验证，其目的是为了获得、改进、发展、测试试验方法的统一，正确地进行食品分析。 其可达到的目的： 方法由资深化验员使用，可达到预想的精度和准度。精度是来衡量波动的，精度是实际样品分析的准确程度的。 2. ?? 方法的实用性，简单、快速、可靠。 3. 可用性。 微生物的制备和培养决定着细胞的生理状况，而这些生理状况接影响到微生物的测试结果，只有群体细胞均匀，试验结果才能稳定。 此外，还有需要实际考虑的方面：快速性、经济性、简便程序和客户要求等等。还有出口商品微生物鉴定时，基于这一点，微生物实验室应该对出口国的同种类型食品采用不同种方法，必须考虑食品被出口国所使用的具体分析方法。 列如：根据国家质检总局质检食函[2004]273号文件的要求，我国对禽肉中沙门氏菌的检测方法要与美国USDA或FDA现行方法等效，我局微生物实验室尽快采用ISO 6579：2002-07-15方法进行了对方法的验证。 SN方法：以无菌方式进行多点取样25g+225ml缓冲蛋白胨水，经37℃水浴4h培养，进行非选择性增菌；确保濒于死亡的细菌进行复活。其后移取10ml转种于盛有100ml四硫磺酸盐煌绿增菌液，经42±1℃培养20±2h，进行选择性的增菌；使目的菌优胜出来。将增菌液摇匀，以无菌操作，分别接种DHL和BS平板上于37℃培养24±2h，进行分离培养；使目的菌分离出来。观察每个平板上的菌落，选取3-5个菌落接种于TSI或尿素酶琼脂上，于37℃中培养24±2h，进行筛选试验；将符合沙门氏菌特征的TSI中的培养物，接种于营养琼脂平板上，37℃中培养24±2h，进行纯化培养；选取单个菌落，接种于20E微量生化管中，进行API生化鉴定；同时取单个菌落，在洁净的玻板上，作血清学鉴定。 ISO方法：以无菌方式进行多点取样（有代表性的并完好无损）25g+225ml缓冲蛋白胨水，经37℃孵育18±2h，进行非选择性