台湾大肠菌群检测方法.DOCVIP

台湾环保署大肠菌检测方法简介 高瑞坤 姜欣欣 （厦门市环境监测中心站 厦门 361004） 摘 要 总大肠菌群（Total Coliforms）和大肠杆菌（E.coli）是当前国内、外环境监测部门评价水体污染程度的公认指标和主要监测项目之一。本文介绍了台湾环保署应用酵素变色及荧光反应的方法，检测水中的总大肠菌群（Total Coliforms）和大肠杆菌（E.coli），可以在24小时获得检测结果，准确检测水中的总大肠菌群（Total Coliforms）和大肠杆菌（E.coli）的数量。 关键词 台湾环保署，大肠菌群，检测方法 1 范围 本方法适用于地面水、地下水、饮用水及水源水质中总大肠菌群（Total Coliforms）及大肠杆菌（E.coli）之检测；但不适用于未处理的废水及污水之检测。 2 原理 本方法系利用总大肠菌群（Total Coliforms）能产生β-D-galactosidase酵素分解Ortho-nitrophenyl-β-D-galactopyranoside（ONPG）之特性，使培养液形成黄色；以及大肠杆菌（E.coli）产生之β-glucuronidase酵素分解4-methyl-umbelliferyl-β-D-glucuronide（MUG），使培养液在波长366nm之紫外光照射之下产生萤光，来判断水样中是否含有总大肠菌群（Total Coliforms）及大肠杆菌（E.coli）。 3 试剂 3.1 Minimal Medium ONPG-MUG (MMO-MUG)培养基 (为美国IDEXX公司生产的商品化制品) 4 设备 4.1 量筒：使用100、500、1000 mL 之量筒。 4.2 吸管：使用1、5 及10 mL之无菌玻璃或无菌塑料吸管，准确度应达0.1 mL。 4.3 稀释瓶：使用100、250、500及1000 mL能耐高压灭菌之玻璃制品，作为样品稀释及检测用。 4.4 采样容器：使用100、250 或500 mL能耐高压灭菌之硼硅玻璃制品。使用市售无菌袋亦可。 4.5 试管：可灭菌之玻璃或塑料制品，大小约15 mm×10 mm，或其它适当大小，可以容纳10 mL以上之水样者。 4.6 培养箱：温度能保持在35±1℃者。 4.7高压灭菌锅：用于采样瓶、稀释瓶、试管及废弃样品等之灭菌。能以中心温度121℃灭菌15 分钟以上者。 4.8 干热灭菌器（烘箱）：用于玻璃器皿等用具之灭菌。温度能保持在160℃达2 小时或170℃达1 小时以上者。 4.9 紫外光灯：6w、波长366 nm之紫外灯（含密闭可遮光之观测箱），可作为萤光反应之观察者。 4.10 定量盘：塑料制无菌定量培养用，含51个孔穴，每一孔穴可容纳2 mL的水样。 4.11 封口机：可作为51孔多管酦酵法（MPN）定量盘封口者。 5 培养基的主要成分 每1000ml商品化的Minimal Medium ONPG-MUG(MM0-MUG)培养基的所含基本成分： 硫酸铵 （NH4）SO4 5.0g 硫酸锰 Mn（SO4）2 0.5mg 硫酸锌 ZnSO4 0.5mg 硫酸镁 MgSO4 100mg 氯化钠 NaCl 10g 氯化钙 CaCl 50mg 亚硫酸钠 NaSO3 40mg 两性激素B Amphoritericin B 1mg Orthonitrophenyl-?-D-galactosidase (ONPG) 500mg 4-methyl-umbelliferyl-?-D-glucuronide (MUG) 70mg Solanium萃取物 500mg 钠盐 5.3g N-2-Hydroxyethylpiperazine-N1-2-ethane sulphonic acid 6.9g 6 步骤 6.1 阳性/阴性反应测试（Presence/Absence Test，P/A） 以100 mL之无菌血清瓶量取100 mL之水样，加入 2.7±0.5 g之MMO-MUG培养基粉末，混摇均匀使之完全溶解后，置入35±1℃的培养箱内培养24小时。 6.2 10管式多管酦酵法（Multiple-tube Fermentation