丙二醛含量测定.pdf

实验四 植物叶片 过氧化脂质含量的变化 陈福龙、冯丽 学时：3 一、实验目的： 学习和掌握丙二醛法测定植 物叶片中过氧化脂质含量的原理 和方法。 二、实验原理: 1、膜脂过氧化作用： 植物器官衰老或在逆境下遭受伤害，细胞中产 生超氧阴离子自由基和羟基自由基，诱导膜质中 的不饱和脂肪酸发生膜脂过氧化作用，产生脂质 自由基。其不仅可诱发脂质进一步过氧化作用， 而且又可使蛋白质脱H+ 而产生蛋白质自由基，使 蛋白质分子发生链式聚合，细胞膜变性，细胞损 伤或死亡。 二、实验原理: 2、丙二醛（MDA）是常用的膜脂过氧化指标 ： 膜脂过氧化作用中，产生丙二醛 （MDA ），其含 量可以反映植物遭受逆境伤害的程度。 在酸性和高温条件下， MDA可以与硫代巴比妥酸 （TBA）反应生成红棕色的三甲川 （3,5,5-三甲基恶 唑2,4-二酮），其最大吸收波长在532nm 。 H+ · · O 2 O O O O · H H 丙二醛 二、实验原理: 3、可溶性糖的干扰： 但是测定植物组织中MDA时受多种物质的干扰，其中 最主要的是可溶性糖，糖与TBA显色反应产物的最大 吸收波长在450nm ，532nm处也有吸收。植物遭受干旱 高温、低温等逆境胁迫时可溶性糖增加，因此测定植 物组织中MDA—TBA反应物质含量时一定要排除可溶性 糖的干扰。 三、实验材料、仪器和试剂： 1、实验材料：三叶草 2、仪器: 离心机，天平，试管，研钵，容量瓶， Spc22-可见分光光度计等。 3、试剂： 20%三氯乙酸（TCA ）； 0.5%硫代巴比妥酸(TBA)(先加少量的氢氧化钠 （1mol/L）溶解， 再用20％的三氯乙酸定容) 。 四、实验步骤： 1、取三叶草0.5g ，洗净、凉干，剪碎置于研钵中， 加少量石英砂和2ml水，研成匀浆，转移到试管， 再用3ml水分两次洗研钵，合并提取液。 2、在提取液中加入5ml 0.5%的硫代巴比妥酸溶液， 摇匀。 3、用试管夹夹住试管置于沸水中加热10分钟( 自有 小气泡产生后计时)，冷却至室温。 4、冷却后，离心15分钟（3500r/min ），取上清 液量其体积（N），以一定量的0.5%的硫代巴比妥 酸为空白对照，分别测出其在450nm 、532nm和 600nm下的O.D值。 五、结果与计算： MDA的浓度 C( μmol/L) =6.45(A532 - A600) - 0.56A450 过氧化脂质MDA含量(μmol/g) =C×V×10-3/W 六、思考题 哪些因