食用百合试管苗原生质体制备条件的优化.pdfVIP

研究论文 中 国 蔬 菜 CHINA VEGETABLES 2015（3）：54 - 57 食用百合试管苗原生质体制备条件的优化 * 陈　曼　涂艺声 　叶丽婻 （江西师范大学生命科学学院，江西南昌 330022） 摘　要 ：以龙牙百合试管再生苗小鳞茎为试材，利用正交试验优化原生质体制备参数，并探讨酶解振荡速度、酶解时间、原 生质体收获时离心速度和原生质体纯化媒介蔗糖浓度等对原生质体产量的影响。结果表明：1.0% 纤维素酶、1.0% 果胶酶酶 解继代培养 40 d 的试管再生苗鳞茎 3 h，酶解时振荡速度 50 r·min-1 ，收获原生质体时离心条件为 700 r·min-1 、6 min，获 取的原生质体最后用 25% 蔗糖纯化的组合条件最佳，1 g 鳞茎能获得 6.60×106 个·mL-1 活原生质体。 关键词 ：龙牙百合；试管再生苗鳞茎；原生质体制备；正交试验；优化 食用百合鳞片肉质细腻、软、糯，纤维少，香 细胞杂交技术即原生质体融合技术，作为传统育种 绵纯甜，富含糖、蛋白质、果胶、多种维生素及钙、 的辅助手段，不仅能够克服有性生殖障碍，而且可 磷、锌、铁、硒等 13 种微量元素和 18 种氨基酸（杨 以同时有效转移核基因与胞质基因，促使优良性状 云光和邓成忠，2002）。龙牙百合是我国主栽食用 的种内、种间、属间整合，从而获得有性杂交无法 百合品种之一，被誉为“蔬菜人参”，不仅营养丰富， 得到的优良种质资源（喻艳，2013）。除此之外， 还有药用价值和保健功能，具有润肺、止咳、清热、 体细胞杂交技术还大大缩短了育种周期，为植物 安神和利尿等功效（卢其能，2002）。可是，近年 遗传育种工作的进行开辟了一条崭新的途径（周玲 来龙牙百合品种严重退化，抗逆性差，阻碍了食用 艳 等，2009）。在体细胞杂交过程中，原生质体的 百合的发展，急需对栽培品种进行改良或创新。体 获得及培养是进行细胞融合的前提性工作（张宁， 2011）。原生质体在培养过程中受多种因素影响， 包括酶种类、酶解时间、渗透压、稳定剂、品种、 陈 曼， 女， 硕 士 研 究 生， 专 业 方 向： 植 物 生 物 技 术，E-mail： 957746499@ 外植体、培养基、培养方法、培养密度、生长激素 * 通讯作者（Corresponding author）：涂艺声，女，教授，专业方向：植 等（张颖 等，2010）。高产量、高活力原生质体的 物生物技术，E-mail：ysttz2012@163.com 获得是原生质体成功培养的一个重要环节。 收稿日期：2014-07-18；接受日期：2014-12-11 目前国内对于百合原生质体的研究报道尚少， 基金项目：江西省自然科学基金项目（20114BAB204024），江西省教育 厅重点计划项目（GJJ11017） 仅秦晓杰等（2013）对东方百合原生质体培养进行 Abstract ：363 pepper（Capsicum spp. ）local varieties from 31 provinces and cities in China were selected as experimental material， and identification with artificial inoculation was conducted for their resista