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甲基化DNA免疫共沉淀—实时定量PCR及技术服务 （MeDIP—qPCR） 实时荧光定量PCR技术是在PCR反应体系中加入荧光试剂，利用荧光信号实时检测PCR进程，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。实时荧光定量PCR 能够专一，灵敏，快速，高重复地精确定量起始模板的浓度。康成生物将实时定量PCR技术与MeDIP技术完美结合。先通过MeDIP技术富集的甲基化的DNA片段，再利用实时荧光PCR技术进行检测，经过数据分析处理得到检测的生物样品中特定位点的甲基化水平的精确数值。 MeDIP—q PCR技术特点： 高特异性，针对感兴趣的基因启动子或CpG岛设计实时定量PCR引物； 超宽的线性范围，可跨越7个数量级； 可以进行高通量检测； 不需要标记探针； 精确度高，重复性好； 灵敏度高 康成生物MeDIP—PCR技术服务流程（图1）： 将基因组DNA 超声打断成400bp-500bp片段 加热变性，并将变性后的单链DNA样品分为两份。 其中一份单链DNA样品加入抗5’-甲基胞嘧啶抗体。另一份作为Total Input DNA样品。 使用亲和层析分离C步样品中的甲基化DNA片段的抗体复合物，样品中其余的非甲基化DNA片段被洗脱。纯化得到甲基化DNA 片段（MeDNA-IP DNA）。 real-time PCR检测 实验数据处理： Total Input DNA 样品作为模板，用待测基因特异性的引物进行real-time PCR检测得到Ct(input) MeDNA-IP DNA样品作为模板进行检测得到Ct MeDNA-IP 待测基因甲基化DNA免疫沉淀（MeDIP）的效率(MeDNA-IP/ Total input)。可以通过Ct值计算得到。计算公式为： % (MeDNA-IP/ Total input)= 2^[(Ct(input)– Ct MeDNA-IP)]x 100 图1 康成生物MeDIP—PCR技术服务流程
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