肝窦内皮细胞窗孔扫描电镜样品的制备及观察.pdfVIP

广 西 医 科 大 学 学 报 JOURNALOFGUANGXIMEDICALUNIVERSITY 肝窦内皮细胞窗孔扫描电镜样品的制备及观察 李 刚 莫肖敏△ 李景强1 赵铁建1 (广西医科大学医学科学实验中心电镜室 南宁 530021) 摘要 目的：探讨肝窦内皮细胞窗孔扫描电镜样品的制备方法及观察其超微结构。方法：分别取经过灌注冲洗预固定和未灌 注冲洗预固定的两组标本，经戊二醛前固定和四氧化锇后固定，稍延长水洗和脱水时间，两组均控制六甲基二硅胺烷干燥和真 空干燥，采取多次短时的方式进行离子喷镀；电镜下观察肝窦内皮细胞的超微结构。结果：灌注冲洗预固定组电镜下观察肝组 织结构较清晰，肝窦暴露内皮细胞，易见肝窦内皮细胞窗孔。结论：本文为制备肝窦内皮细胞窗孔的扫描电镜样品提供了有效 的技术手段。 关键词 肝窦；内皮细胞窗孔；扫描电镜；电镜样品制备 33 930X(2014 中图分类号：R 文献标志码：A 文章编号：1005 肝窦内皮细胞是肝窦管壁的主要成分，是一种具有诸多 洗肝组织内部血液，直至肝组织流出液体不带血色时为止。 功能的间质细胞，它参与正常肝细胞的物质交换。在肝窦壁 上的内皮细胞最薄处有许多无隔膜的窗孔，它是肝血窦内皮 约10n15 细胞与肝细胞间物质交换的重要通道，是一种动态的生物滤 固定，直接取材后进入3％戊二醛固定液。 过器，是维持肝细胞微环境稳定的重要结构。随着对肝组织 病理学的不断研究，对肝窦内皮细胞的研究也日益引起人们 取出一小块无被膜包裹的肝组织后，再进一步修成2～ 3 mm 的关注E1--3]，尤其是使用扫描电镜观察肝窦壁窗孔超微结构。 但有关肝组织肝窦窗孔扫描电镜样品的制备方法报道尚少。 混合液中，然后用0．1 由于肝组织内有丰富的肝窦，且肝窦腔大而不规则，内含许 15 h 多有形血液等物质成分，如果采用常规扫描电镜样品制备方 后，分别用0．1mol／L的磷酸缓冲液漂洗3次，每次15rain， 法，将很难观察到肝窦内皮细胞理想效果。我们结合肝窦组 随后用1％锇酸(四氧化锇)后固定(4℃，1．5h)，再用 织学特点和研究要求，建立了灌注冲洗预固定和未灌注冲冼 0．1mol／L磷酸缓冲液冲洗3次，每次15rain。 预固定组，进行对照实验并在电镜下观察，取得了较为满意 1．3．3 清冼、脱水和喷镀：经锇酸固定后的标本，用磷酸缓 的效果。 冲液清洗3次；常规乙醇梯度脱水r 90％一(100％×3)]，每次各15 1材料与方法 次，每次10rain；真空干燥；IB5型离子镀膜仪喷镀金，采用 1．1主要试剂：多聚甲醛(粉末状、国药集团化学试剂有限 公司)、25％戊二醛溶液(分析纯；国产、国药集团化学试剂有察拍照。未灌注冲洗预固定的小白鼠取材后样品制备和电 镜观察同上。 限公司；进口分装、阿法埃莎(天津)化学有限公司)、Nett 500mg锇酸(四氧化锇；进VI、美国)、乙醇(95％分析纯、成都 2 结 果 市科龙化工试剂厂)、六甲基二硅胺烷(分析纯、国药集团化 学试剂有限公司)。 未灌注冲洗预固定的肝组织，肝细胞索和肝窦结构模糊 1．2