第三章 高效液相色谱法 B.pptVIP

3、硬质凝胶（无机凝胶） 是具有一定孔径范围的多孔性凝胶，如多孔硅胶、多孔玻璃珠等 凝胶化学惰性、稳定性及机械强度均好，耐高温，使用寿命长，但装柱时易碎，不易装紧，柱效较低。 （三）流动相 选择依据（从样品的溶解性考虑） 流动相应与凝胶本身有相似性 黏度低 与样品的折光率相差大 能润湿凝胶，防止吸附作用 常用的流动相有四氢呋喃、甲苯、N，N’-二甲基甲酸胺、三氯甲烷（凝胶渗透色谱）；水（凝胶过滤色谱）等。 第四节 液相色谱法流动相 一、流动相选择的一般要求 1、流动相的纯度 2、流动相与固定相不互溶，不发生化学反应 3、对试样要有适宜的溶解度 4、必须与检测器匹配 5、溶剂的粘度要小，可以降低色谱柱的阻力 二、常用溶剂的极性 常用溶剂的极性顺序为： 水（极性最大）、甲酰胺、乙腈、甲醇、丙醇、丙酮、四氢呋喃、醋酸乙酯、乙醚、二氯甲烷、氯仿、环己烷、己烷、… 三、流动相的选择 根据流动相所起的作用，可以把溶剂分为底剂和洗脱剂两种 底剂决定基本的色谱分离情况 洗脱剂则是为了调节试样组分的滞留并对某几个组分具有选择性的分离作用 1、键合相色谱法 正相色谱： 底剂采用低极性溶剂，如正己烷、苯、氯仿等； 洗脱剂则根据试样的性质，有针对性地选择极性较强的溶剂如醚、酯、酮、醇和酸等； 反相色谱中： 以水为流动相的主体，以加入不同配比的有机溶剂作调节剂。常用的有机溶剂是甲醇、乙腈、二氧六环、四氢呋喃等 2、离子交换色谱法 离子交换色谱法在含水介质中进行 组分的保留值可用流动相中盐的浓度（或离子强度）和pH来控制，增加盐的浓度导致保留值降低。 3、排阻色谱法 排阻色谱法所用的溶剂必须与凝胶本身非常相似，这样才能润湿凝胶并防止吸附作用。 对分离高分子有机化合物，采用的溶剂主要是四氢呋喃、甲苯、间甲苯酚、N,N-二甲基甲酰胺等 生物物质的分离主要用水、缓冲盐溶液、乙醇及丙酮等 第五节 色谱分离条件选择 一、 减小柱内展宽，提高柱效 l、固定相 ? 选粒径小的、分布均匀的球形固定相 ? 首选化学键合相，匀浆法装柱 2、流动相 选用低粘度的流动相，有利于增大组分在溶剂中的扩散系数Dm，减少传质阻力 例：甲醇、乙腈等 3、 流速 约1ml/min 4、柱温的选择： 选室温250C左右 二、减少柱外展宽 1、柱前展宽： 主要由进样引起，减小进样器的死体积 2、柱后展宽： 主要由接管、检测器流通池体积及检测器响应时间等因素所引起 三、分离类型的选择 1、分析的目的是什么 2、分析对象性质及其结构是什么？ 3、分析样品的复杂程度，大概有多少种组分 4、样品量、样品的形态 5、要求的检测限、测定限、灵敏度、分析时间 6、有无分析实例和标准样品以及相关分析资料 7、实验设备情况 液相色谱分离类型选择参考表 第六节 高效液相色谱法的应用 一、在食品分析中的应用 1、食品营养成分分析：蛋白质、氨基酸、糖类、色素、维生素、香料、有机酸（邻苯二甲酸、柠檬酸、苹果酸等）、有机胺、矿物质等； 2、食品添加剂分析：甜味剂、防腐剂、着色剂（合成色素如柠檬黄、苋菜红、靛蓝、胭脂红、日落黄、亮蓝等）、抗氧化剂等； 3、食品污染物分析：霉菌毒素（黄曲霉毒素、黄杆菌毒素、大肠杆菌毒素等）、微量元素、多环芳烃等。 二、在环境分析中的应用 多环芳烃（特别是稠环芳烃）、农药（如氨基甲酸脂类，反相色谱）残留等。 三、在生命科学中的应用 1、低分子量物质，如氨基酸、有机酸、有机胺、类固醇、卟啉、糖类、维生素等的分离和测定。 2、高分子量物质，如多肽、核糖核酸、蛋白质和酶（各种胰岛素、激素、细胞色素、干扰素等）的纯化、分离和测定。 例1. 环境中有机氯农药残留量分析 固定相：薄壳型硅胶(37 ～50?m) 流动相：正己烷 流 速：1.5 mL/min 色谱柱：50cm?2.5mm(内径) 检测器：差示折光检测器 可对水果、蔬菜中的农药残留量 进行分析。 例2. 稠环芳烃的分析 稠环芳烃多为致癌物质。 固定相：十八烷基硅烷化键合相 流动相：20%甲醇-水 ～100%甲醇 线性梯度淋洗，2%/min 流 速：1mL/min 柱 温：50 oC 柱 压：70 ?104 Pa 检测器：紫外检测器 四、在医学检验中的应用 1、合成药物：抗生素、抗忧郁药物（冬眠灵、氯丙咪嗪、安定、利眠宁、苯巴比妥等）、黄胺类药等。 2、天