生化实验操作考核要点(新).docVIP

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生化实验操作考核要点(新).doc

【实验操作考核要点】 一、目的要求 1.掌握组织样品的制备方法,了解其注意事项。 2.了解肝糖原提取、糖原和葡萄糖鉴定与蒽酮比色测定糖原含量的原理和注意事项,掌握其操作方法。 3.正确操作使用刻度吸管和可调微量移液器。 4.熟练运用溶液混匀的各种方法(视具体情况,采用合适的混匀方法)。 5.正确掌握溶液转移的操作。 6.正确操作使用分光光度计。 二、操作考核内容 按百分制计。 1.吸量管操作(20分); 2.可调式微量移液器操作(20分); 3.溶液混匀操作(视具体情况,采用合适的混匀方法)(15分); 4.溶液转移操作(10分); 5.分光光度计比色操作(25分)。 6.整体表现(10分)。 三、操作考核标准 (一)吸量管操作(20分,每项操作5分) 1.执管 要求右手拿吸量管,左手拿橡皮球,只能用食指而不能用拇指按压吸量管上口来调节吸取液量的刻度;吸液、排液整个操作过程吸量管应始终保持垂直。 2.坐姿 要求腰、背保持竖直,看刻度时眼睛保持平视。 3.吸取溶液 吸量管插入液面深度约0.5cm,不能一插到底,也不能插入过浅而吸进空气致使溶液进入橡皮球内;调控吸量管吸取液量的刻度时,吸量管尖应离开液面靠在容器内壁上。 4.排出液体 吸量管尖应靠上受纳容器内壁,让管内溶液自然流出。不能用橡皮球吹压,而且在流净后吸量管尖停靠受纳容器内壁至少3秒。 (二)可调式微量移液器操作(20分,每项操作5分) 1.设定容量值 转动加样器的调节旋钮,反时针方向转动旋钮,可提高设定取液量。顺时针方向转动旋钮,可降低设定取液量。在调整设定移液量的旋钮时,不要用力过猛,并应注意使取液器显示的数值不超过其可调范围。 2.吸液 (1)选择合适的吸头安放在取液套筒上,稍加扭转压紧吸嘴使之与套筒之间无空气间隙; (2)把按钮压至第一停点,垂直握持加样器,使吸头浸入液面下2~3毫米处,然后缓慢平稳地松开按钮,吸入液体,等一秒钟,然后将吸头提离液面,贴壁停留2-3秒,使管尖外侧的液滴滑落。 3.放液 (1)将吸头口贴到容器内壁底部并保持100°~40°倾斜; (2)平稳地把按钮压到第一停点,等一秒钟后再把按钮压到第二停点以排出剩余液体; (3)压住按钮,同时提起加样器,使吸头贴容器壁擦过,再松开按钮。按吸头弹射器除去吸头。 4.压放按钮时保持平稳;加样器不得倒转;吸头中有液体时不可将加样器平放。取液器吸嘴为一次性使用。实验完毕,将取液器读数调至最大量程值,竖立放于支架上。 (三)溶液的混匀(操作流程中下划实线的三处,每项操作5分,共15分) 1.肝糖原的提取与鉴定操作中,肝匀浆上清液中加5ml 95%乙醇后的混匀最好用倾倒混匀,也可用滴管或吸量管吸、吹混匀,或用玻璃棒搅拌混匀。 2.肝糖原定量测定中,肝组织消化液沸水浴后全部转入100 ml容量瓶,加水至刻线后的混匀应采用倒转混匀。 3.肝糖原定量测定中,加蒽酮溶液后的混匀,可将试管倾斜约45o再作旋转混匀。因蒽酮溶液(浓硫酸配制)比重大于样品水溶液很多,一加入便沉于管底(加试剂的顺序一定不能颠倒),不倾斜试管旋转混匀不了。 (四)溶液的转移(操作流程中下划波纹线的两处,每项操作5分,共10分) 1.在研钵中研磨后的肝匀浆转入试管离心可用滴管或取液器吸取转移,如果采用倒入,不能洒落管外,应尽量转移干净。 2.肝组织沸水浴后的消化液转入100 ml容量瓶前应冷却;转入时用玻璃棒引入,玻璃棒头插入容量瓶靠瓶颈磨口下约1cm处,玻璃棒上端不要靠上瓶口边沿,引入时试管口靠玻璃棒的位置靠近容量瓶口,不要离开瓶口太高,以免消化液沾染玻璃棒较长;转入过程中,溶液不要沾染到容量瓶磨砂口上,更不能滴洒到容量瓶外面;应用蒸馏水洗消化管3遍以上,洗液一并全部转入容量瓶。 (五)分光光度计的操作(25分) 1.波长选择,仪器调零,灵敏度挡选择等操作正确(5分)。 2.溶液转移到比色杯操作(10分) 手接触比色杯毛面;倒液量不超过比色杯体积的2/3;比色溶液不能洒落在色杯外或试管外;溅出比色杯外液体的擦拭;空白液、标准液、待测液的放置顺序;不能在仪器上方倒液。 3.比色操作(5分):盖盖;调透光度;空白调零;测定(拉杆、记录)。 4.比色后操作(5分):比色杯溶液的倒出;比色杯清洗。 (六)整体表现(10分) 1.小组分工协作有序,不忙乱。 2.实验结束后实验台面的整理:器材按要求清洗干净、器材与试剂瓶归回原位和台面卫生整洁。 四、实验报告结果要求 1.肝糖原的提取、鉴定 鉴定方法①和鉴定方法②中最后的“呈色对比”和“观察颜色变化”,结果一定要明确表达是“有变化”或“没有变化”,有变化的话还要具体写出变成什么颜色了。而且要作出明确结论:“有糖原”或“没有糖原”,如果颜色转变成红色不很明显,可以写“有少量糖原”、“有极少量糖原” 或“有微量糖

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