结核分枝杆菌H37Ra菌株ESAT6基因的克隆及序列分析.pdf

1324 JBengbuMedColl，October2014，Vo1．39，No．10 [文章编号]1000-2200(2014)10—1324-04 ·基础 医学 · 结核分枝杆菌H37Ra菌株 ESAT6基因的克隆及序列分析 王 英 ，薛玉芹 ，王雪梅 ，陈 勇 ，李江艳 ，李 倩 ，唐 洁 ，夏 惠 ，方 强 [摘要]目的：从结核分枝杆菌H37Ra菌株克隆早期分泌性抗原靶6(ESAT6)基因并进行序列分析。方法：以结核分枝杆菌 H37Ra菌株基因组DNA为模版，用PCR方法扩增 ESAT6基因，将扩增产物连接到克隆载体pTG19一T中，并用PCR、单双酶切 和测序进行鉴定，以BLAST软件进行序列比对分析。结果：从结核分枝杆菌H37Ra株成功克隆了ESAT6基因，测序表明该片 段由288bp组成 ，与GenBank所报告的H37Rv基因相 比同源性为 100％。结论：成功克隆了H37Ra株 ESAT6编码基因，其序 列与H37Rv标准株 ESAT6编码基因完全一致。 [关键词]结核分枝杆菌；H37Ra株；早期分泌性抗原靶6基因；克隆；序列分析 [中国图书资料分类法分类号]R378．91 [文献标志码]A CloningandsequentialanalysisofESAT6geneofMycobacterium tuberculosisII37Ra WANG Ying一，XUEYu—qin ，WANG Xue—mei一，CHEN Yong2 ， LIJiang—yan ，LIQian ，TANGJie ，XIAHui一，FANGQiang， (．DepartmentofMicrobiologyandParasitology，2．AnhuiKeyLaboratoryofInfectionandImmunity， 3．DepartmentofImmunology，BengbuMedicalCollege，BengbuAnhui233030，China) [Abstract]Objective：TocloneandsequencetheESAT6genefrom Mycobacterium tubewulosis(MTB)H37Ra．Methods：The encodinggene ofESAT6 was amplified from MTB H37Ra genomic DNA using PCR technique．The amplified PCR productwas subclonedintopTG19一Tvector．ThetargetgenewasidentifiedbyPCR，singleanddoubleenzymedigestion，sequencingandsequence alignmentanalysiswithBLAST software．Results：TheESAT6genewassuccessfullycloned．Thesequencingshowedthefragmentlength was288bp，whichwashomologywiththeMTB H37RagenereportedbyGenBank．Conclusions：ThecodinggeneofESAT6from MTB H37Raissuccessfullycloned． [Keywords]Mycobacteriumtuberculosis；H37Ra；ESAT6；clone；sequenceanalysis 结 核 分 枝 杆 菌 (Mycobacterium tuberculosis， 卡介苗 (BCG)和大部 分非致 病分枝 杆菌 中缺 MTB)感染是严重危害人类健康的人兽共患传染病， 失 J。结核病患者淋巴细胞分泌的 干扰素能识 虽然患结核病的人数不断下降，防治措施也取得了 别 ESAT6抗原并为记忆性 T细胞识别的主要靶抗 一 定的成效，但 MTB与人类免疫缺陷病毒(HIV)伴 原，具有较强的免疫原性和免