《DNA的粗提取与鉴定》.pptVIP

* DNA的粗提取与鉴定 1、DNA的溶解性 DNA和蛋白质等其他成分在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同，利用这一特点，选择适当的盐浓度就能使DNA充分溶解，而使杂质沉淀，或者相反，以达到分离目的。 ①根据DNA在NaCl溶液中的溶解度曲线图，思考在什么浓度下，DNA的溶解度最小？ DNA在NaCl溶液中的溶解度是如何变化的？ ②如何通过控制NaCl溶液的浓度使DNA在盐溶液中溶解或析出？ 2、DNA在酒精溶液中的溶解性 DNA不溶于酒精溶液，但是细胞中的某些蛋白质则可以溶于酒精。利用这一原理，可以将DNA与蛋白质进一步分离 3、DNA对酶、高温和洗涤剂的耐受性 ①蛋白酶能水解蛋白质，但是对DNA没有影响 ②大多数蛋白质不能忍受60－80℃的高温，而DNA在80℃以上才会变性 ③洗涤剂可以溶解细胞的细胞膜，去除脂质和蛋白质,但对DNA没有影响 4.DNA的鉴定 DNA与二苯胺（沸水浴）会染成蓝色 （一）实验材料的选取 （二）破碎细胞，获取含DNA的滤液 思考：为什么加入蒸馏水能使鸡血细胞破裂？ 2、植物细胞 ①植物细胞需要先用一定的洗涤剂和食盐，进行充分的搅拌和研磨。 讨论：如果研磨不充分，会对实验结果产生怎样的影响？ （三）去除滤液中的杂质 为了纯化提取的DNA，需要将滤液作进一步处理 讨论：此步骤获得的滤液中可能含有哪些细胞成分？ 答：可能含有核蛋白、多糖和RNA等杂质 为什么反复地溶解与析出DNA，能够去除杂质？ 方案一 利用DNA在不同浓度的NaCl溶液中溶解度的 不同，通过控制NaCl溶液的浓度去除杂质。具体做法 是：在滤液中加入NaCl，使NaCl溶液物质的量浓度为 2mol/L，过滤除去不溶的杂质，再调节NaCl溶液物质 的量浓度为0.14mol/L，析出DNA，过滤去除溶液中的 杂质，再用物质的量浓度为2mol/L的NaCl溶液溶解DNA 方案二 直接在滤液中加入嫩肉粉，反应10~15分钟， 嫩肉粉中的木瓜蛋白酶能够分解蛋白质。 方案三 将滤液放在60~75℃的恒温水浴箱中保温10～15 分钟，注意严格控制温度范围。 （四） DNA的析出与鉴定 实验中对DNA进行鉴定时做如下操作: c: 实验结论 b: a: 实验现象 沸水浴5min 沸水浴5min 4 加4mL二苯胺,混匀 加4mL二苯胺,混匀 3 不加 加丝状物并搅拌 2 加入2mol/L的NaCl溶液5mL 加入2mol/L的NaCl溶液5mL 1 B A 试管 序号 变蓝 不变 丝状物主要是DNA