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组织细胞培养技术总结 1 玻璃器皿的洗涤? 玻璃器皿的清洗 玻璃器皿的清洗包括浸泡、刷洗、浸酸和冲洗四个步骤（1）浸泡：需先用清水浸泡。然后用稀盐酸液浸泡过夜，以中和其中的碱性物质。再次使用的玻璃器皿则常附有大量刚使用过的蛋白质，干固后不易洗掉，故用后要立即浸入水中，且要求完全浸入，不能留有气泡或浮在液面上。（2）刷洗：浸泡后的玻璃器皿一般要用毛刷沾洗涤剂刷洗，以除去器皿表面附着较牢的杂质。刷洗要适度，过度会损害器皿表面光泽度。（3）浸酸：清洁液是由重铬酸钾、浓硫酸和蒸馏水按一定比例配制而成，其处理过程称为浸酸。清洁液去污能力很强。是清洗过程中关键的一环。浸泡时器皿要充满清洁液，勿留气泡或器露出清洁液面。浸泡时间一般为过夜，不应少于6小时。清洁液可根据需要，配制成不同的强度，常用的下列三种： 重铬酸钾（g） 浓硫酸（ml） 蒸馏水（ml） （A）强清洁液 63∶1000∶200000 （B）次强清洗液 120∶200∶1000 （C）弱清洁液 100∶100∶100。配制过程中可使重铬酸钾溶于水中，然后慢慢加浓硫酸。并不停的用玻璃棒搅拌，使产生的热量挥发。清洁液配制时应注意安全，须穿戴耐酸手套和围裙，并要保护好面部及身体裸露部分。（4）冲洗：玻璃器皿在使用后，刷洗及浸后都必须用水充分冲洗。胶塞的清洗细胞培养中所用的橡胶制品主要是瓶塞。新购置的瓶塞带有大量滑石粉及杂质，应先用自来水冲洗，再做常规处理，常规清洗方法是：每次用后立即置入水中浸泡，然后用2% NaOH或洗衣粉煮沸10-20 分钟，以除掉培养中的蛋白质。自来水冲洗后，再用1%稀盐酸浸泡30分钟或蒸馏水冲洗后再煮沸10-20分钟，晾干备用。塑料制品的清洗必要时用2% NaOH 浸泡过夜，用自来水充分冲洗，再用5%盐酸溶液浸泡30 分钟，最后用自来水和蒸馏水冲洗干净，晾干备用。 化学实验中使用的器皿应洗净，其内壁被水均匀润湿而无条纹、不挂水珠。? ?1．用去污粉、洗涤剂洗? ? ?出现水珠或油花的仪器应当重新洗涤。洗净的仪器不能用纸或抹布擦干，以免将脏物或纤维留在器壁上面沾污了仪器。仪器倒置时应放在干净的仪器架上（不能倒置于实验台上）。锥形瓶、容量瓶等仪器可倒挂在漏斗板或铁架台上。小口颈的试管等可倒插在特别的干净的支架上。? ?2．铬酸洗液? ? ?滴定管、移液管、容量瓶等具有精确刻度的仪器，常用铬酸洗液浸泡15min左右，再用自来水冲净残留在器皿上的洗液，然后用蒸馏水润洗2～3次。? ? ?铬酸洗液的配制：在台秤上称取10g工业纯K2Cr2O7（或Na2Cr2O7）置于500mL烧杯中，先用少许水溶解，在不断搅动下，慢慢注入200mL浓硫酸（工业纯），待K2Cr2O7全部溶解并冷却后，将其保存于带磨口的试剂瓶中。所配的铬酸洗液为暗红色液体。因浓硫酸易吸水，用后应将磨口玻璃塞子塞好。? ?使用洗液应按以下顺序操作：? ?（1）用洗液洗涤前，凡能用毛刷洗刷的仪器必须先用自来水和毛刷洗刷，倾尽水，以免洗液被稀释后降低洗涤效果。? ?（2）洗液用过后倒回原磨口瓶中，以备下次再用。当洗液变为绿色而失效时，可倒入废液桶中，绝不能倒入下水道，以免腐蚀金属管道。? （3）用洗液洗涤过的仪器，应先用自来水冲净，再以蒸馏水润洗内壁2～3次。? （4）洗液为强氧化剂，腐蚀性强，使用时特别注意不要溅在皮肤和衣服上。? ?必须指出：洗液不是万能的，以为任何污垢都能用它洗去的说法是不对的。如被MnO2沾污的器皿，用洗液是无效的，此时可用草酸、盐酸或酸性Na2SO3等还原剂洗去污垢。? ?3．用其它溶剂洗? ? ?光度法中所用比色皿，是由光学玻璃制成的，不能用毛刷刷洗。通常视沾污的情况，选用铬酸洗液、HCl-乙醇、合成洗涤剂等浸泡后，用自来水冲洗净，再用蒸馏水润洗2～3次。 ?（1）NaOH – KMnO4水溶液? ? ?称取10g KMnO4放入250 mL烧杯中，加入少量水使之溶解，再慢慢加入100 mL 10% NaOH溶液，混匀即可使用。该混合液适用于洗涤油污及有机物。洗后在器皿中留下的MnO2·nH2O沉淀物可用HCl－NaNO2混合液、酸性Na2SO3或热草酸溶液等洗去。?（2）KOH－乙醇溶液? ? ?适合于洗涤被油脂或某些有机物沾污的器皿。?（3）HNO3－乙醇溶液? ? 适合于洗涤油脂或有机物沾污的酸式滴定管。使用时先在滴定管中加入3 mL乙醇，沿壁加入4 mL浓HNO3，盖住滴定管管口，利用反应所产生的氧化氮洗涤滴定管。器械刷洗? ???肥皂水刷洗—自来水冲—烘干—硫酸高锰酸钾液浸泡6小时（过夜更方便）—自来水冲15遍—蒸馏水冲3遍—烘干—高压灭菌刷洗使用洗洁精更省事，禁用洗衣粉，因为会留下很多白印记，烘干时对于培养板及塑料培养瓶温度不