人白细胞介素_12的纯化及鉴定.pdfVIP

安徽农业科学 , Journal of Anhu i A gri. Sci. 2009 , 37 ( 14) : 6353 - 6355 责任编辑 　王淼 　责任校对 　汪伟 人白细胞介素 12 的纯化及鉴定 1 2 3 黄 进 ,罗 果 ,葛正龙 　( 1. 遵义医学院珠海校区生物工程系 ,广东珠海 51904 1; 2. 遵义医学院中心实验室 ,贵州遵义 563000; 3. 遵义 医学院生物化学教研室 ,贵州遵义 563000) ( ) 摘要　[ 目的 ]利用人白细胞介素 12 hum an interleukin 12, h IL 12 转基因马铃薯 ,探讨 h IL 12 的纯化条件 。[方法 ]提取转基因马铃薯 中的总蛋白, h IL 12 的分离纯化步骤包括超滤、MKF - A IW 阴离子交换层析、MKF - C IC 阳离子交换层析 。在阴离子交换层析吸附过程 中采用试管法选择最佳吸附 pH 值 ,选择洗脱过程最佳洗脱 pH 值 ;选择阳离子交换层析洗脱过程最佳洗脱 pH 值 ; EL ISA 法测定各纯化 阶段收集的上清液或洗脱峰中的 h IL 12 的含量 ;非还原 SD SPA GE 电泳鉴定蛋白纯度 ;W estern B lot检测纯化的 h IL 12。[结果 ]阴离子 交换层析吸附过程最佳吸附 pH 值为 7. 5,洗脱过程最佳洗脱 pH 值为 7,阳离子交换层析洗脱过程最佳洗脱 pH 值为 6. 5。纯化的 h IL 12 经非还原 SD SPA GE分析蛋白纯度为 91% 。W estern B lot分析结果表明,在 40 kD 处有特异的蛋白条带出现 。[结论 ] h IL 12 转基因马 铃薯经总蛋白提取 ,超滤 ,阴离子交换层析 ,阳离子交换层析纯化 ,获得了高纯度的 h IL 12。 关键词　人白细胞介素 - 12;纯化;转基因马铃薯 ( ) 中图分类号　S188　　文献标识码　A　　文章编号　0517 - 6611 2009 14 - 06353 - 03 Pur if ica tion and Iden tif ica tion of Hum an In terleuk in 12 ( ) HUA NG J in et a l　 D ep artm ent of B ioengineering, Zunyi M edical Co llege Zhuhai Campu s, Zhuhai, Guangdong 51904 1 A b stract　[Objective ] The study aim s to discu ss purification condition s by u sing hum an interleuk in 12 ( h IL 12 ) from tran sgen ic potatoe s. [M ethod s] Total p rotein is extracted from tran sgen ic potatoe s and concentrated solu tion is purified a s fo llow: u ltrafiltration , M KFA IW an ion exchange chrom atography and M KFC IC cation exchange chrom atography. B e st ad sorp tion pH value and best elu tion pH value are selected in adsorp tion and elu tion p roce ss of