外切-β-葡聚糖酶基因重组里氏木霉的筛选及其产酶性能.pdfVIP

第 65 卷 第 8 期 化 工 学 报 Vol.65 No.8 August 2014 2014 年 8 月 CIESC Journal ·3122 · 外切-β-葡聚糖酶基因重组里氏木霉的筛选及其产酶性能 孔芹，方浩，夏黎明 （浙江大学生物质化工教育部重点实验室，化学工程与生物工程学系，浙江杭州 310027 ） 摘要：外切-β-葡聚糖酶是纤维素酶的重要组分之一，提高该组分的活力是增强纤维素酶协同降解性能、降低纤维 素水解成本的关键。分别采用微晶纤维素琼脂平板法和滤纸崩解法，对已有的基因重组转化子进行筛选试验，获 得了 6 个优良转化子，其滤纸崩解速率和微晶纤维素琼脂平板上的生长速率都较大。进一步在摇瓶条件下进行复 筛试验，获得了外切-β-葡聚糖酶（C ）高产转化子Trichoderma reesei ZU-101，液体培养 48 h，其 C 酶活力可达 1 1 18.24 U ·ml− 1，是出发菌株的 2.16 倍；分析结果表明：重组转化子的纤维素酶体系中内切- β-葡聚糖酶和纤维二 糖酶的活力与出发菌株相比变化不大，但由于外切- β-葡聚糖酶活力得到了大幅度提高，纤维素酶的总活力（滤纸 酶活力 FPA ）也提高了 61.9%。采用纤维素酶对碱预处理玉米秸秆进行酶解试验，当酶用量为 20 FPIU ·(g 底物)− 1， 水解 48 h，重组转化子T.reesei ZU-101 纤维素酶的酶解得率高达 94.4%。本文的研究结果在可再生纤维素资源的 生物转化与利用方面具有广阔的应用前景。 关键词：重组里氏木霉；外切- β-葡聚糖酶；转化子筛选；玉米秸秆；酶水解 DOI ：10.3969/j.issn.0438-1157.2014.08.037 中图分类号：TQ 920 文献标志码：A 文章编号：0438—1157 （2014）08—3122—06 Screening and cellulase production of recombinant Trichoderma reesei with high activity exo-β-glucanases KONG Qin, FANG Hao, XIA Liming (Key Laboratory of Biomass Chemical Engineering of Ministry of Education, Department of Chemical Engineering and Bioengineering, Zhejiang University, Hangzhou 310027, Zhejiang, China) Abstract: Increasing the activities of exo-β-glucanases, one of the important components of cellulase, is a key to strengthening the synergistic degradation of cellulase and reducin