CCM3基因缺陷对铅所致小鼠胚胎成纤维细胞遗传毒性影响的体外研究.pdfVIP

生堡亟堕匿堂苤查!Q!i生!旦筮塑鲞釜!塑g地!』旦竺!丛塑：丛!望!!!!!：!!!：塑：盟!：i ．基础研究． CCM3基因缺陷对铅所致小鼠胚胎成纤维 细胞遗传毒性影响的体外研究 苏晓琳邢秀梅赖关朝 孙易 赵志强 陈静莉 申碧羚 刘新霞 何云 【摘要】 目的探讨CCM3基因缺陷对醋酸铅所致小鼠胚胎成纤维细胞遗传毒性的影响。 方法将C57雌鼠与CCM3基因敲除小鼠杂合雄鼠合笼后，取孕13．5d的胎鼠，原代分离培养胚胎 成纤维细胞。基因分型后，野生型和CCM3基因缺陷型细胞分别给予6．25、12．50、25．00、50．00、 100．00、200．00 p。mol／L醋酸铅处理，用MTS法检测细胞活性，并根据实验结果，选择6．25、25．00、 blot法检测相关基因的蛋白表达 100．00斗mol／L醋酸铅染毒，用双核阻滞法检测遗传毒性，用Western 情况。结果小鼠胚胎成纤维细胞经醋酸铅处理24h后，野生型细胞100．00 txmol／L醋酸铅处理组 (69．16±1．36)与对照组(100．00±2．33)相比，细胞活性下降了30％，杂合型细胞100．00 I山mol／L醋 酸铅处理组(87．16±5．50)与对照组(100±2．06)相比，细胞活性下降了13％，差异有统计学意义 (F旰毕犁=98．59，F套合到=82．63，P值均0．001)。经醋酸铅处理48h后，野生型细胞100．00t上molfL 醋酸铅处理组(51．99±5．62)与对照组(100．00±3．11)相比，细胞活性下降了50％，杂合型细胞 100．00 4-5．72)相比，细胞活性下降了35％， t上mol／L醋酸铅处理组(66．33±4．06)与对照组(100．00 差异均有统计学意义(F刚．型=82．63，F禁合型=36．86，P值均0．001)。双核微核实验结果显示，随着 染毒剂量增加，两种基因型细胞的核分裂指数逐渐下降，双核细胞微核率呈逐渐升高趋势，野生型细 胞对照组、6．25、25．00、100．00 txmol／L剂量组的双核微核细胞率分别为29．6±2．2、47．3±6．6、 55．5±9．1、66．84-3．5(／1 000)；杂合型细胞的双核微核细胞率则分别为35．3±5．6、50．0±8．3、 57．0±8．5、58．84-2．1(／1000)。Westernblot结果显示，野生型细胞100．00 p．mol／L醋酸铅处理组 (0．70±0．03)的CCM3表达量是对照组(0．53±0．07)的1．32倍，杂合型细胞100．00 ixmol／L醋酸铅 处理组(0．48±0．02)的CCM3表达量是对照组(0．27±0．04)的1．77倍，缺陷型细胞升高较多，差异 Ixmol／L醋酸铅处 有统计学意义(F野生型=14．77，F杂合刊=25．74，P值均0．001)；野生型细胞100．00 理组(0．69±0．03)的1一H2AX表达量是对照组(0．65±0．07)的1．06倍，杂合型细胞100．00I山mol／L 醋酸铅处理组(0．994-0．04)的CCM3表达量是对照组(0．64±0．06)的1．55倍，差异有统计学意义 (F野唯到=7．08，P=0．012；F茫合犁=13．49，P=0．002)。结论CCM3基因可能在铅所致小胚胎成纤维 细胞的遗传毒性中发挥作用，在小鼠胚胎成纤维细胞毒性方面，铅暴露与CCM3基因存在交互作用。 【关键词】铅；小鼠；CCM3基因；胚胎成纤维细胞；细胞毒性 EffectofCCM3defectonlead-inducedce