海带多糖的抗辐射作用与淋巴细胞凋亡关系研究_罗琼.pdfVIP

第26 卷第6 期 营 养 学 报 Vol.26,No. 6 2004 年 12 月 ACTA NUTRIMENTA SINICA Dec. , 2004 海带多糖的抗辐射作用与淋巴细胞凋亡关系研究 1 罗 琼， 吴晓旻 ， 杨明亮， 黄晓兰， 阎 俊 （武汉大学公共卫生学院卫生学教研室，湖北武汉 430071， 1武汉市疾病预防控制中心，湖北武汉 430022） 【摘要】目的：探讨海带多糖（LJP）抗辐射作用与淋巴细胞凋亡的关系。方法：将Wistar雄性 大鼠随机分为对照组，模型组和4个不同剂量LJP实验组（100、200、300、400 mg/kg），每组6只。 对照组，模型组每只给予2 ml生理盐水，实验组给予不同浓度等量LJP溶液。灌胃10d后模型组和实 60 验组行一次性全身 Coγ射线照射，每只剂量 9.0 Gy，18h后测定各组大鼠脾脏淋巴细胞增殖反应； 腹腔巨噬细胞数目及吞噬功能；血清溶血素；迟发性变态反应及脾淋巴细胞凋亡率和凋亡相关基因 Bcl-2和Bax蛋白的表达。结果：LJP各实验组与模型组比较，能非常显著地对抗辐射对相关免疫指标 的抑制作用(P0.01)。TUNEL实验与流式细胞术均说明LJP对照射诱导的大鼠脾淋巴细胞凋亡具有一 定的拮抗作用，并呈现浓度的依赖效应。免疫组化结果显示：随着LJP含量的增加，照射后脾淋巴细 胞的Bcl-2蛋白表达增加而Bax蛋白表达下降，Bcl-2/Bax上升。 结论：LJP抗辐射作用的可能机制之 一是使凋亡抑制基因Bcl-2表达上调、促凋亡基因Bax蛋白表达下调，Bcl-2/Bax比值明显增大，防止 脾淋巴细胞凋亡，促进免疫功能恢复。 关键词： 海带多糖； 辐射； 淋巴细胞； 凋亡； 凋亡相关基因 中图分类号：R151.1 文献标识码：A 文章编号：0512-7955(2004)06-0471-03 海带(Laminaria japonica Aresch)属海带目 300，加g0.1 mol/L稀盐酸 1000 ml和0.1 mol/L 海带科,是一种营养价值较高的大型褐藻。1913年 甲醛1.5 ml，室温搅拌1 h，提取2次后过滤。 滤液用0.5 mol/L的NaOH中和至中性后离心。用 Kylin从掌状海带中提取出海带多糖（Laminaria japonica polysaccharides，LJP），主要由岩藻糖 100 ku滤膜超滤，浓缩除盐，浓缩液用60%乙醇 硫酸酯构成，同时还含有少量的半乳糖、木糖、甘 醇析，静置 1 h后离心得沉淀，再用无水乙醇洗 露糖。近年来研究表明，LJP具有抗凝血、抗动脉 2次,乙醇洗涤沉淀后减压干燥得粗多糖。每1 g [1] 粗多糖溶于20 ml水溶液中，加入 3%的三氯乙酸 硬化、抗肿瘤、抗病毒、抗辐射等多种生物活性 。 [2] 去除游离蛋白质，0.5 mol/L的NaOH中和至中性 邓槐春 发现 LJP一次注射，可提高 9.0Gy照射 小鼠的存活率，使照射动物的脾脏造血灶、白细胞、 后离心。滤液上 2.6 cm×40 cm的DEAE纤维素柱 骨髓有核细胞数比模型组提高 2倍左右,但有关机 （OH型）用0.25 mol/L的NaCl溶液洗脱。先以 制未见报道，本研究探讨LJP的抗辐射作用与免疫 250 ml NaCl溶液淋洗，然后用NaCl溶液进行线 系统及脾淋巴细胞凋亡的关系。 性梯度洗脱，自动收集器分管收集，每管6 ml。 以岩藻糖作为标准曲线，苯酚-硫酸法以Beckman 1 材 料 与 方 法 DU 640型分光光度计检测每管在490 nm处的光 1.1 LJP的提取 密度值。根据测得的光吸收值作吸收曲线图，收 干海带，清水洗净，风干