在体制备大鼠全肾去细胞支架的程序性分析.pdfVIP

第45卷第2期 解 剖 学 报 V01．45，NO．2 ‘267· 2014年4月 ACTAANATOMICASINICA Apr．2014 在体制备大鼠全肾去细胞支架的程序性分析 赵丽娜 余雅玲 林刻智 邵营宽 王志斌 陈加俊 梅劲+ 唐茂林4 (温州医科大学人体解剖学教研室，浙江温州 325035) [摘要] 目的 通过在体灌注TritonX一100、SDS溶液法制备大鼠全肾去细胞生物支架，并对支架制备过程中 的关键步骤进行程序性检测、分析，为制备科学合理的实验用大鼠全肾去细胞生物支架提供基础。方法 sD大鼠 PBS、TritonX一100灌注组(HT组)；肝素PBS、TritonX一100、十二烷基硫酸钠(SDS)溶液灌注组(HTS组)。HE、 Masson、PAS染色及透射电镜观察各组’肾组织病理及超微结构改变，免疫荧光结合4，6-二脒基一2一苯基吲哚(DAPI) 观察各组胶原蛋白Ⅳ(collagen 性蛋白(elastin)及细胞核的表达情况，总DNA测定各组DNA残留浓度。结果TritonX一100、SDS灌注6h左右制 备大鼠肾脏去细胞生物支架。在灌注过程中，肾内细胞和细胞碎片逐渐被清洗，最终变成半透明状。HE、Masson、 PAS染色及透射电镜显示连续分布、形态排列类似肾小球、肾小管轮廓结构的网状结构，基膜连续完整。免疫荧光 IV、LN、FN、HSPG2、elastin都较好的得 结合DAPI染色结果表明，去细胞过程中细胞外基质中的重要蛋白collagen 到了保存，细胞核在灌注过程中逐渐减少，直至完全消失；最终残留组织的DNA为4．90p,g／g。结论通过合适浓 度和灌注比例的TritonX一100、SDS制备大鼠肾脏去细胞生物支架，并对其进行程序性分析，发现能有效清除大鼠肾 内所有细胞成分，较完整的保留网络状肾及肾血管细胞外基质结构和成分，是一种简单易行且较为理想的制备实 验用全肾生物支架的方法。 [关键词]去细胞；肾脏；细胞外基质；化学法；灌注法；组织工程；大鼠 R318 A [DOI] [中图分类号] [文献标志码] 10．3969／j．issn．0529—1356．2014．02．023 ofthemethodforthedecellularization analysis Programmed ofintactrat invivo kidney ZHAO Mao—lin+ Li—na，YUYa—ling，LINKe—zhi，SHAOYing．kuan，WANGZhi—bin，CHENJia—jun，MEIJin+，TANG Medical Wenzhou (DepartmentofAnatomy，WenzhouUniversity，Zhejiang325035，China) for intactrat To the data anewidealmethodthatcan the [Abstra