旋毛虫肌幼虫三种抗原的免疫印迹分析.pdfVIP

中国^兽共患赢杂志 1990年第6卷第 5期 旋毛虫肌幼虫三种抗原的免疫印迹分析 中山医科大学寄生虫学羲研室 宗粤琦 ’ 劳特云 摘要 应用酶联免疫 即迹分析旋毛虫飘幼虫的表面抗原、s，抗原和 虫体粗抗原 鳍果显示上进三种抗原的多 肽蛆成存在一定的差异 。与同辣摩肇竟血清反应，显示表面抗原有4十免疫反应匡带，分子量范围在 J02～44KD 之间。岛抗原和虫体粗抗原舟别有 8和 10十主要区带，舟予量范围在 73～l6KD之间 与异舞礴挚免血清反应， 显示上速抗原 的低分子量多肤有较强的特异性。束兔感染旋毛虫后．血清抗辟对采面抗原的识别。在不同感染 时期具有相 同的反应 圈谱 ，而对其他两种抗原的识别刑具有黔段性的改变 关■调 旋毛虫 抗原 啤联免疫印违 旋毛虫抗原是一组较复杂的抗原 ．根据其来源，可 置 {Or过夜 。离 (]0O000S、1h) 以分为表面抗原、分泌排泄抗原和虫体抗原 3类uJ现 收集上清 ，即为SFA。 已知肌幼虫的表面抗原和分泌排泄抗原是两娄重鬟的 (兰)盟体楹抗原 (cwE)的制各 {参照 Ruitenberg 功能性抗原。对上述抗原进行分析．有助于提高旋毛 (1974)方法 。睹哪瘦进 。取纯净的肌幼虫种 连量的 虫病免疫诊断的特异性和敏感性 。 0．01M 礴 酸 缓 冲癌 (PH7．2)，匀 壤 (200听p丌一， 本文应用酶联免疫印迹 (ELm)对旋毛虫肌幼虫 30rain)，然后用超青粉碎机 (Soniprsp150MSF．)冲击 的表面抗原、S抗墙和《虫体粗抗原进行初步分析，以 10rain 将 匀浆置 {℃放 置 48h后 离 心 (1500os、 期能为旋毛虫晴的免疫诊断提供一些依据 ， 30rain)。取出上清即为CWE。 上述 3种抗原 用 FoIF--酚试剂测定蛋 白台量 ．讣 材料和方法 装后冻干 ．置 4C密封保存。 一 、 抗原的制备 二、血清的制各 9其体重为 3．5--qkg雄性家兔 (一)表面抗墙《(sA)的制备 ：参冁|妇螂1ds等方 经 感染肌幼虫 (j5~00／蹑)，4天旨开始来血 ，持续 法m。将纯净的肌幼虫放入古 O．2s (w／v)CrAB 观察 6十月。同蛆血清混台，P上感染后 3{天血情匀阳 b~．nlde)的MEM s培 性对照血清 1{铡正常家兔温合血清为阴啦对 养液中，37G-培养 1．5小时，中间振荡数攻。取出培 日奉血哑虫 、华支睾吸虫和猪蛔虫兔盛染血清均 养液上清，10000g离心 5rain。吸取上清即为SA 由人工感染家兔榭得 ，由出山医科大学寄生虫学教 (二)sa抗原 (SFA)的制各 ；参照Despt,mmi~r等 宣提供．同种j6清【混台后置-_2O℃保存 方法 。取适量纯净的肌幼虫加A O25M蔗糖藩梭， 三 、ElⅢ 接芹运松等 (I984t曲直法 进行。sⅨ； 按下列步骤翻备SFA。 ~ pAOE 采甩浓崖梯度凝艘垂直板状 电泳系统。分离 匀菜 (2000rpm、5mln) 腔浓崖梯崖 IO～20 ，浓缩睦浓度为 5 。加样量 + 为 SAl3峙／nm ，SFA和 CWE为 6~S／mm。标准 蛋白 离心 (600S．2．5min，上述过程重复 10趺) (中科院870302)分子量范围为94～l75KD。电转印 过程在 4C下 ，稳流，96mA，转印2．5h。硝酸纤维膜 收集上清、离心 (10